商品属性
产品名称 | 肌酸激酶(CK)测试盒 | 产品货号 | BH-961123 |
规格 | 100管/96样、50管/48样 | 产品分类 | 辅酶Ⅱ系列 |
测试方法 | 微量法、紫外分光光度法 | 用途 | 仅供科研实验 |
测定意义与原理
测定意义
肌酸激酶(CK，EC2.7.3.2)是一种重要的能量代谢酶，主要功能包括：能量转运：催化肌酸和ATP之间的转磷酰基反应，在能量运转、肌肉收缩和ATP再生中起关键作用临床诊断：CK活性升高是心肌梗死、病毒性心肌炎、肌营养不良等疾病的重要诊断指标科研应用：用于研究肌肉能量代谢、运动生理、药物毒理等领域
测定原理（以速率法为例）
采用偶联酶法检测CK活性，反应式如下： 磷酸肌酸+ADP→CK肌酸+ATP磷酸肌酸+ADPCK肌酸+ATP 葡萄糖+ATP→己糖激酶(HK)6-磷酸葡萄糖+ADP葡萄糖+ATP己糖激酶(HK)6-磷酸葡萄糖+ADP 6-磷酸葡萄糖+NADP+→葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H+6-磷酸葡萄糖+NADP+葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H+ NADPH在340nm处有特征吸收峰，通过监测吸光度上升速率计算CK活性。
试剂盒组成
组分 规格 作用说明
试剂1（R1） 4×60mL/2×60mL等 含磷酸肌酸、D-葡萄糖、AMP、ADP、AP5A、Mg2+、N-乙酰半胱氨酸等
试剂2（R2） 2×30mL/1×30mL等 含NADP+、己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、BISTris缓冲液等
校准品 1×2mL 用于建立标准曲线，校准仪器
质控品 1×2mL 用于质量控制，确保检测结果准确性
其他检测方法试剂组成
荧光免疫层析法：标准物质、酶标板、检测缓冲液、酶标记溶液、洗涤缓冲液、停止溶液
ELISA法：酶标板、标准品、检测抗体、酶标记物、显色液、终止液、洗涤液
自备仪器与试剂
必备仪器
紫外分光光度计/全自动生化分析仪（340nm检测通道）
台式高速离心机（≥3000g）
恒温水浴锅（控温精度±0.5℃）
可调式移液器（0.5-10μL、10-100μL、100-1000μL）
酶标仪（仅用于荧光免疫层析法/ELISA法）
必备耗材
1mL石英比色皿/96孔板
离心管（1.5mL、10mL）
一次性无菌吸头
研钵/组织匀浆器（冰浴专用）
自备试剂
蒸馏水/去离子水
生理盐水（0.85% NaCl）
抗凝剂（肝素/EDTA，仅用于血浆样本）
样本前处理方法
血清/血浆样本血清样本：静脉采血后室温放置30-60min，3000g 4℃离心10min，取上清液血浆样本：静脉采血时加入抗凝剂（肝素/EDTA），3000g 4℃离心10min，取上清液样本采集后应尽快检测，2-8℃可保存3天，-20℃可保存1个月，避免反复冻融
组织样本取新鲜组织，用生理盐水冲洗干净，滤纸吸干水分称取0.1g组织，加入1mL预冷提取液，冰浴匀浆12000g 4℃离心15min，取上清液置冰上待测若酶活性过高，可用提取液稀释1-5倍后测定
细胞样本收集对数生长期细胞，8000g 4℃离心5min弃上清加入1mL预冷提取液重悬，冰浴超声破碎（功率20%，超声3s/间隔10s，重复30次）12000g 4℃离心10min，取上清液置冰上待测
测定操作步骤
速率法/连续监测法操作
试剂准备：
从2-8℃取出试剂盒，室温平衡20min
开启仪器，预热30min，设定波长340nm，温度37℃
按仪器要求设置参数：反应时间10min，延迟时间1min，读数时间3min
样本测定：
取比色皿，依次加入：试剂1 900μL + 样本100μL
混合均匀，37℃预温育5min
加入试剂2 100μL，立即混匀，开始计时
连续监测340nm处吸光度变化，记录每分钟吸光度变化值（ΔA/min）
空白测定：
用蒸馏水替代样本，同法操作，记录空白吸光度变化值（ΔA空白/min）
计算结果：
ΔA/min = 测定管ΔA/min - 空白管ΔA/min
CK活性（U/L）= ΔA/min × K（仪器常数，根据仪器参数计算）
ELISA法操作
标准曲线建立：
稀释标准品至不同浓度（0、50、100、200、400、800U/L）
每孔加入100μL标准品或样本，37℃孵育1h
弃去孔内液体，洗涤3次，每次3min
每孔加入100μL酶标记抗体，37℃孵育1h
弃去孔内液体，洗涤5次，每次3min
每孔加入100μL显色液，37℃避光孵育15min
每孔加入50μL终止液，用酶标仪读取450nm处吸光度值
结果计算：
以标准品浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线
根据样本吸光度值，从标准曲线上计算CK浓度
酶活力计算方法
单位定义
U/L：每升样本每分钟生成1μmol NADPH的酶量
U/mgprot：每mg蛋白每分钟生成1μmol NADPH的酶量
U/g鲜重：每g组织鲜重每分钟生成1μmol NADPH的酶量
计算公式
CK活性(U/L)=ΔA/min×V反总×106ε×d×V样CK活性(U/L)=ε×d×V样ΔA/min×V反总×106
ΔA/min：每分钟吸光度变化值
V反总：反应体系总体积（1.0mL）
ε：NADPH摩尔消光系数（6.22×10³ L/(mol·cm)）
d：比色皿光径（1cm）
V样：测定时加入样本体积（0.1mL）
简化公式
血清/血浆样本：CK（U/L）= 1608 × ΔA/min
组织样本（蛋白浓度）：CK（U/mgprot）= 1608 × ΔA/min ÷ Cpr
组织样本（鲜重）：CK（U/g鲜重）= 1608 × ΔA/min ÷ W
性能指标
指标 要求
试剂空白吸光度 340nm处≤0.600Abs
每分钟空白变化 ≤0.010Abs/min
批内精密度 CV≤5.0%
批间精密度 极差≤6.0%
准确度 测定值与质控血清靶值相对偏差≤10.0%
灵敏度 150U/L浓度标准液，ΔA/min≥0.0100
测定范围 2U/L~1500U/L，线性相关系数r≥0.990
注意事项
样本处理：
溶血样本会导致CK活性升高，应避免使用溶血样本
剧烈运动后样本CK活性会升高，应避免在运动后立即采血
样本需新鲜制备，避免反复冻融
试剂使用：
试剂使用前需平衡至室温，避免温度差异影响检测结果
不同批号试剂不能混用，需重新校准仪器
开瓶后试剂需密封保存，避免污染
测定过程：
反应温度需严格控制在37℃，避免温度影响酶活性
若吸光度变化值超出线性范围，需稀释样本后重新测定
每个样本需设置平行实验，结果取平均值
质量控制：
每次实验需设置空白对照和质控样本
定期校准仪器，确保检测结果准确性
若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确
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