商品属性
产品名称 | 丙二醛（MDA）测试盒 | 产品货号 | BH-961153 |
规格 | 100管/96样、50管/48样 | 产品分类 | 氧化与抗氧化系列 |
测试方法 | 微量法、可见分光光度法 | 用途 | 仅供科研实验 |
测定意义与原理
测定意义
丙二醛（MDA）是膜脂过氧化的主要产物，是衡量氧化损伤程度的重要指标，其主要意义包括：氧化应激指标：直接反映细胞膜脂质过氧化程度疾病诊断：与多种疾病相关，如心血管疾病、神经退行性疾病、糖尿病、肝脏疾病等环境胁迫：作为植物对干旱、盐渍、重金属等逆境响应的生物标志物衰老研究：可作为衰老程度的评价指标，反映组织氧化损伤水平
测定原理
MDA与硫代巴比妥酸（TBA）在酸性条件下加热反应，生成粉红色的MDA-TBA缩合物： MDA+2TBA→H+MDA-TBA缩合物MDA+2TBAH+MDA-TBA缩合物 该缩合物在532nm处有最大吸收峰，吸光度与MDA浓度成正比。
试剂盒组成
组分 规格 作用说明
试剂一 25mL×1瓶/50mL×1瓶 含10%三氯乙酸（TCA）溶液，用于样本沉淀和提取
试剂二 10mL×1瓶/20mL×1瓶 含0.67%硫代巴比妥酸（TBA）溶液，显色剂
试剂三 1mL×1支/2mL×1支 含10mmol/L MDA标准品，用于建立标准曲线
提取液 100mL×1瓶 含0.1mol/L磷酸缓冲液，pH7.4，用于样本提取
自备仪器与试剂
必备仪器
可见分光光度计/酶标仪（532nm检测通道）
恒温水浴锅（控温精度±0.5℃）
台式高速离心机（≥8000g）
可调式移液器（0.5-10μL、10-100μL、100-1000μL）
研钵/组织匀浆器（冰浴专用）
必备耗材
1mL玻璃比色皿/96孔板
离心管（1.5mL、10mL）
一次性无菌吸头
手术剪/镊子（用于组织样本处理）
自备试剂
蒸馏水/去离子水
生理盐水（0.85% NaCl）
抗凝剂（肝素/EDTA，仅用于血浆样本）
样本前处理方法
动植物组织样本取新鲜组织，用生理盐水冲洗干净，滤纸吸干水分称取约0.1g组织，加入1mL预冷提取液，冰浴匀浆8000g 4℃离心10min，取上清液置冰上待测若MDA浓度过高，可用提取液稀释1-5倍后测定
细菌/细胞样本收集对数生长期细菌/细胞，8000g 4℃离心5min弃上清按照细菌或细胞数量(10⁴个):提取液体积(mL)=500~1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）8000g 4℃离心10min，取上清液置冰上待测
液体样本（血清/血浆/尿液/脑脊液等）血清样本：血液凝固后3000g 4℃离心10min，取血清上清血浆样本：加入抗凝剂（肝素/EDTA）后3000g 4℃离心10min，取上清尿液/脑脊液：新鲜样本3000g 4℃离心10min，取上清样本可直接检测，无需提取处理；浓度过高时可用生理盐水稀释
测定操作步骤
分光光度法操作
试剂准备：
试剂一：液体25mL×1瓶，4℃保存
试剂二：液体10mL×1瓶，-20℃保存，用时加10mL蒸馏水溶解
试剂三：液体1mL×1支，-20℃保存，用时加9mL蒸馏水溶解
标准品稀释：将试剂三（10mmol/L MDA标准品）用蒸馏水稀释成0、1、2、3、4、5μmol/L的标准系列
标准曲线绘制：
取比色管，依次加入标准品溶液0.5mL + 试剂二0.5mL
混匀，沸水浴中加热15min，立即冰浴冷却
8000g离心10min，取上清液在532nm波长下测定吸光度
以MDA浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线
样本测定：
分光光度计预热30min，调节波长到532nm，蒸馏水调零
空白管：取比色管，依次加入提取液0.5mL + 试剂二0.5mL
测定管：取比色管，依次加入样本0.5mL + 试剂二0.5mL
混匀，沸水浴中加热15min，立即冰浴冷却
8000g离心10min，取上清液测定吸光度（A空、A样）
微量法（酶标仪）操作96孔板每孔加入：样本50μL + 试剂二50μL混匀，沸水浴中加热15min，立即冰浴冷却3000g离心5min，取上清液在532nm波长下测定吸光度同时绘制标准曲线，根据标准曲线计算MDA浓度
含量计算方法
计算公式
MDA浓度(nmol/g鲜重)=C×V总×D×1000WMDA浓度(nmol/g鲜重)=WC×V总×D×1000 MDA浓度(nmol/mL)=C×1000×DMDA浓度(nmol/mL)=C×1000×D
C：从标准曲线上查得的MDA浓度（μmol/L）
V总：样本提取液总体积（mL）
D：样本稀释倍数（未稀释则为1）
W：组织鲜重（g）
简化公式
组织样本：MDA（nmol/g鲜重）= (A样 - A空) × 100 ÷ W
液体样本：MDA（nmol/mL）= (A样 - A空) × 100
性能指标
指标 要求
线性范围 0~5μmol/L，线性相关系数r≥0.995
最低检测限 ≤0.1μmol/L
回收率 90%~110%
批内精密度 CV≤5.0%
批间精密度 CV≤8.0%
稳定性 4℃保存12个月，活性保留≥90%
注意事项
样本处理：
样本需新鲜制备，避免MDA分解；-80℃可保存1个月
匀浆与超声破碎需在冰浴中进行，控制温度在0-4℃
样本需避免氧化，处理过程中尽量减少与空气接触
试剂使用：
TBA溶液对光敏感，配制后需避光保存
标准品需现配现用，避免MDA分解
不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线
测定过程：
沸水浴时间需严格控制在15min，避免显色过度
若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定
每个样本需设置平行实验，结果取平均值
质量控制：
每次实验需设置空白对照和质控样本
定期校准仪器，确保检测结果准确性
若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确
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