商品属性
产品名称 | 超氧阴离子测试盒 | 产品货号 | BH-961162 |
规格 | 100管/96样、50管/48样 | 产品分类 | 氧化与抗氧化系列 |
测试方法 | 微量法、可见分光光度法 | 用途 | 仅供科研实验 |
测定意义与原理
测定意义
超氧阴离子（O₂⁻·）是一种活性氧自由基，是有氧代谢的副产物，其生理和病理意义包括：氧化应激标记：直接反映细胞内氧化还原状态，是氧化损伤的重要指标植物抗逆性：参与植物对干旱、盐渍、重金属、高温等逆境胁迫的响应疾病关联：与动脉粥样硬化、心脑血管疾病、癌症、神经退行性疾病等密切相关免疫防御：在免疫细胞中作为杀伤病原体的重要武器信号传导：参与细胞增殖、分化、凋亡等生理过程的信号调控
测定原理
采用羟胺氧化法，超氧阴离子（O₂⁻·）与羟胺反应生成亚硝酸盐，亚硝酸盐在酸性条件下与对氨基苯磺酸和α-萘胺反应生成红色偶氮化合物，在530nm处有最大吸收峰，吸光度与O₂⁻·含量成正比。反应式如下： 2O2−+NH2OH→NO2−+O2+H2O2O2−+NH2OH→NO2−+O2+H2O NO2−+对氨基苯磺酸+α-萘胺→酸性条件红色偶氮化合物NO2−+对氨基苯磺酸+α-萘胺酸性条件红色偶氮化合物
试剂盒组成
组分 规格 作用说明
试剂A 液体25mL×1瓶 含0.1mol/L Tris-HCl缓冲液，pH8.2，用于反应体系构建
试剂B 液体10mL×1瓶 含10mmol/L盐酸羟胺溶液，反应底物
试剂C 液体10mL×1瓶 含对氨基苯磺酸-α-萘胺混合液，显色剂
试剂D 液体10mL×1瓶 含3mol/L乙酸溶液，提供酸性反应环境
标准品 液体1mL×1支 含100μmol/L NaNO₂标准品，用于建立标准曲线
提取液 液体100mL×1瓶 含0.1mol/L Tris-HCl缓冲液，pH8.2，用于样本提取
自备仪器与试剂
必备仪器
分光光度计/酶标仪（530nm检测通道）
低温离心机（≥8000g）
恒温水浴锅（控温精度±0.5℃）
可调式移液器（0.5-10μL、10-100μL、100-1000μL）
研钵/组织匀浆器（冰浴专用）
必备耗材
1mL玻璃比色皿/96孔板
离心管（1.5mL、10mL）
一次性无菌吸头
手术剪/镊子（用于组织样本处理）
自备试剂
蒸馏水/去离子水
生理盐水（0.85% NaCl）
液氮（可选，用于植物样本速冻）
样本前处理方法
动植物组织样本取新鲜组织，用生理盐水冲洗干净，滤纸吸干水分称取约0.1g组织，加入1mL预冷提取液，冰浴匀浆8000g 4℃离心15min，取上清液置冰上待测若O₂⁻·含量过高，可用提取液稀释1-10倍后测定
细胞/细菌样本收集对数生长期细胞/细菌，8000g 4℃离心5min弃上清按照细胞/细菌数量(10⁴个):提取液体积(mL)=500~1000:1的比例（建议500万细胞/细菌加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）8000g 4℃离心15min，取上清液置冰上待测
植物叶片样本取新鲜叶片，用生理盐水冲洗干净，滤纸吸干水分称取约0.1g叶片，加入1mL预冷提取液，冰浴匀浆8000g 4℃离心15min，取上清液置冰上待测若O₂⁻·含量过高，可用提取液稀释1-10倍后测定
测定操作步骤
羟胺氧化法操作
试剂准备：
试剂A：液体25mL×1瓶，4℃保存
试剂B：液体10mL×1瓶，-20℃保存，用时加10mL蒸馏水溶解
试剂C：液体10mL×1瓶，4℃保存
试剂D：液体10mL×1瓶，4℃保存
显色工作液：试剂C + 试剂D，按体积比1:1混合，现配现用
标准曲线建立：
配制NaNO₂标准系列：0、5、10、20、40、80μmol/L
取比色管，加入标准品溶液0.5mL + 显色工作液0.5mL，混匀
25℃室温反应20min，530nm波长下测定吸光度
以NaNO₂浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线
样本测定：
分光光度计预热30min，调节波长到530nm，蒸馏水调零
反应管：取比色管，加入样本0.5mL + 试剂B 0.5mL，混匀，25℃反应20min
空白管：取比色管，加入提取液0.5mL + 试剂B 0.5mL，混匀，25℃反应20min
向反应管和空白管各加入显色工作液0.5mL，混匀，25℃反应20min
530nm波长下测定吸光度（A样、A空）
荧光法操作（可选）
试剂准备：
荧光探针：DHE（二氢乙啶），浓度10μmol/L
缓冲液：0.1mol/L PBS，pH7.4
染色：
取样本100μL，加入DHE探针1μL，37℃孵育30min
用PBS洗涤2次，离心弃上清
加入PBS重悬，上流式细胞仪或荧光显微镜检测
检测参数：激发波长488nm，发射波长610nm
结果计算方法
单位定义
nmol/g鲜重：每克组织鲜重中O₂⁻·含量
nmol/mL：每毫升样本中O₂⁻·含量
nmol/mgprot：每毫克蛋白中O₂⁻·含量
计算公式
O2−含量(nmol/g鲜重)=(A样−A空)×V总×D(A标−A空标)×C标×WO2−含量(nmol/g鲜重)=(A标−A空标)×C标×W(A样−A空)×V总×D
A样-A空：样本扣除空白后的吸光度值
V总：样本提取液总体积（mL）
D：样本稀释倍数（未稀释则为1）
A标-A空标：标准品扣除空白后的吸光度值
C标：标准品浓度（nmol/mL）
W：组织鲜重（g）
简化公式
按鲜重计算：O₂⁻·（nmol/g鲜重）= 200×(A样-A空)÷W
按液体体积计算：O₂⁻·（nmol/mL）= 200×(A样-A空)
按蛋白含量计算：O₂⁻·（nmol/mgprot）= 200×(A样-A空)÷Cpr
性能指标
指标 要求
线性范围 0~100nmol/mL，线性相关系数r≥0.995
最低检测限 ≤0.5nmol/L
回收率 90%~110%
批内精密度 CV≤5.0%
批间精密度 CV≤8.0%
稳定性 4℃保存12个月，活性保留≥90%
注意事项
样本处理：
样本需新鲜制备，超氧阴离子半衰期短，易分解；-80℃可保存1周
匀浆与超声破碎需在冰浴中进行，控制温度在0-4℃
样本处理过程中需避免氧气暴露，尽量减少与空气接触
试剂使用：
盐酸羟胺溶液需现配现用，避免氧化
显色剂对光敏感，配制后需避光保存，24小时内用完
不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线
测定过程：
反应温度和时间需严格控制在25℃、20min
若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定
每个样本需设置至少3个平行实验，结果取平均值
质量控制：
每次实验需设置空白对照和质控样本
定期校准仪器，确保检测结果准确性
若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确
公司正在出售的产品
胱抑suB检测试剂盒 CSTB/CST6/STFB ELISA Kit | MB49小鼠膀胱癌细胞 |
大鼠超氧化物歧化ELISA试剂盒 | 人原代黄韧带成纤维细胞 |
人热休克蛋白27ELISA试剂盒 | 人黄韧带成纤维细胞 |
人白喉抗体ELISA试剂盒 | 人正常卵巢上皮细胞 IOSE-80(STR鉴定正确) |
人抗核糖体抗体ELISA试剂盒 | DLD-1 (人结直肠腺癌上皮细胞) (STR鉴定正确) |
人抗细胞膜DNA抗体ELISA试剂盒 | 人直肠上皮细胞 |
人抗着丝点抗体ELISA试剂盒 | 人直肠平滑肌细胞 |
大鼠雌二醇受体ELISA试剂盒 | 人软骨细胞永生化 |
人分泌型卷曲相关蛋白2ELISA试剂盒 | 大鼠晶状体上皮细胞 |
大鼠降钙suELISA试剂盒 | NCI-H508[H508]（人结肠直肠腺癌细胞）（STR鉴定正确） |
人70kDa热休克蛋白8ELISA试剂盒 | CAL-27人舌鳞癌细胞 |
人胰岛su受体αELISA试剂盒 | A875人黑色素瘤细胞专用培养基 |
人抗肾上腺皮质抗体ELISA试剂盒 | 超氧阴离子测试盒PANC10.05人胰腺癌细胞 |
人STEAP家族成员1ELISA试剂盒 | 大鼠原代子宫内膜上皮细胞 |
人组织蛋白DELISA试剂盒 | 人肾上腺皮质小细胞癌细胞SW-13(STR鉴定正确) |
胱抑suB检测试剂盒 CSTB/CST6/STFB ELISA Kit | MB49小鼠膀胱癌细胞 |
大鼠超氧化物歧化ELISA试剂盒 | 人原代黄韧带成纤维细胞 |
人热休克蛋白27ELISA试剂盒 | 人黄韧带成纤维细胞 |
人白喉抗体ELISA试剂盒 | 人正常卵巢上皮细胞 IOSE-80(STR鉴定正确) |
关键字： 超氧阴离子;测试盒;
派瑞曼pyram?是上海博湖生物科技有限公司（Shanghai Bohu Biological Technology Co., Ltd.，China）的产品品牌。
派瑞曼pyram?是一家化学、生化和材料科学等领域的科研用研发产品的制造商和供应商,我们的产品在相当宽的基础科学领域得到广泛的应用。 客户包括学术界、工业界和政府的研究和开发实验室以及制药、生物技术、化工/石化行业等具商业规模的企业。
派瑞曼pyram?除包括化学、分析化学、生命科学、材料科学和病理科学产品。质量是所有产品和服务最关键的组成部分,我们通过质量和实力赢得客户的信赖。产品的质量是企业的生命。
公司秉承"专注品质、诚信为本、服务至上、合作共赢"的企业文化积极参与生物领域的技术创新和技术服务,力求为我国科研事业更好的,更专业的服务！