商品属性
产品名称 | 总抗氧化能力（ABTS法）测试盒 | 产品货号 | BH-961166 |
规格 | 100管/96样、50管/48样 | 产品分类 | 氧化与抗氧化系列 |
测试方法 | 微量法、可见分光光度法 | 用途 | 仅供科研实验 |
测定意义与原理
测定意义
总抗氧化能力（T-AOC）反映了生物体内所有抗氧化物质和抗氧化酶的总和：氧化应激评估：直接反映机体氧化与抗氧化系统的平衡状态疾病诊断：与心血管疾病、糖尿病、癌症、神经退行性疾病等密切相关药物筛选：评估中草药、保健食品、化妆品等的抗氧化活性环境毒理：评估环境污染物对生物体氧化损伤的影响抗衰老研究：作为抗氧化能力和衰老程度的重要指标
测定原理
ABTS经氧化后生成稳定的蓝绿色阳离子自由基（ABTS+），在734nm或414nm处有特征吸收峰。待测样品中的抗氧化成分能与ABTS+反应使其褪色，吸光度下降程度与总抗氧化能力成正比： ABTS→氧化剂ABTS+(蓝绿色)ABTS氧化剂ABTS+(蓝绿色) ABTS++抗氧化物质→ABTS+氧化产物(褪色)ABTS++抗氧化物质→ABTS+氧化产物(褪色)
试剂盒组成
组分 规格 作用说明
试剂A 液体60mL×1瓶 含ABTS储备液，用于生成ABTS+自由基
试剂B 粉剂×2瓶 含氧化剂，用于氧化ABTS生成ABTS+
试剂C 液体60mL×1瓶 含pH7.4磷酸盐缓冲液，用于稀释ABTS+和样本
标准品 液体1mL×1支 含10mmol/L Trolox标准品（维生素E类似物），用于建立标准曲线
提取液 液体100mL×1瓶 含pH7.4磷酸盐缓冲液，用于动植物组织和细胞样本提取
自备仪器与试剂
必备仪器
分光光度法：可见分光光度计（734nm检测通道）、1mL玻璃比色皿
微量法：酶标仪（734nm/414nm检测通道）、96孔板
通用：低温离心机（≥10000g）、恒温水浴锅、可调式移液器、漩涡混匀器
必备耗材
离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、研钵/组织匀浆器
自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水、抗凝剂（肝素/柠檬酸钠）
样本前处理方法
液体样本（血清/血浆/唾液/尿液）血清样本：血液凝固后3000g 4℃离心10min，取上清直接测定或-80℃保存（≤30天）血浆样本：用肝素/柠檬酸钠抗凝（不宜用EDTA），5000g 4℃离心10min，取上清待测唾液/尿液：直接测定或-80℃保存，解冻后离心取上清
动植物组织样本取新鲜组织，生理盐水冲洗干净，滤纸吸干水分按组织质量(g):提取液体积(mL)=1:5~10比例（建议0.1g组织加1mL提取液）冰浴匀浆10000g 4℃离心10min，取上清置冰上待测若抗氧化能力过强，可用提取液稀释1-10倍测定
细胞/细菌样本收集500万对数生长期细胞/细菌，8000g 4℃离心5min弃上清加入1mL提取液，冰浴超声波破碎（功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）10000g 4℃离心10min，取上清置冰上待测
中草药/抗氧化剂溶液样本称取约0.1g干燥中草药粉末，加入10mL提取液，室温浸泡2h超声提取30min，过滤或离心取上清用提取液稀释至合适浓度待测抗氧化剂溶液直接用提取液稀释至合适浓度
测定操作步骤
分光光度法操作
试剂准备：
取试剂B一瓶，加入25mL试剂A，震荡混匀20min，静置后取上清作为ABTS+储备液
用试剂C将ABTS+储备液稀释至A734=0.70±0.02，即为工作液（现配现用）
Trolox标准品稀释：用试剂C配制0、2、4、6、8、10mmol/L标准系列
标准曲线建立：
取比色管，加入标准品0.1mL + 工作液0.9mL，混匀后25℃反应6min
734nm波长下测定吸光度，以Trolox浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线
样本测定：
取比色管，加入样本0.1mL + 工作液0.9mL，混匀后25℃反应6min
734nm波长下测定吸光度（A样、A空）
微量法（酶标仪）操作
试剂准备：
ABTS+工作液配制同分光光度法
用试剂C将Trolox标准品稀释成0、2、4、6、8、10mmol/L标准系列
加样反应：
96孔板中每孔加入工作液200μL + 样本/标准品10μL，混匀
25℃避光反应6min，734nm波长下测定吸光度
结果计算方法
单位定义
μmol Trolox当量/g鲜重：每克组织相当于Trolox的抗氧化能力
μmol Trolox当量/mL：每毫升样本相当于Trolox的抗氧化能力
Trolox当量比：样本抗氧化能力与等浓度Trolox的比值
计算公式
T-AOC(μmol TE/mL)=(A空−A样)×C标×V总(A空−A标)×V样T-AOC(μmol TE/mL)=(A空−A标)×V样(A空−A样)×C标×V总
A空-A样：样本导致的吸光度下降值
C标：Trolox标准品浓度（μmol/mL）
V总：反应体系总体积（1.0mL）
V样：样本加入体积（0.1mL）
简化公式
按体积计算：T-AOC（μmol TE/mL）= C标 × (A空 - A样)/(A空 - A标)
按鲜重计算：T-AOC（μmol TE/g鲜重）= C标 × (A空 - A样)/(A空 - A标) × V总/W
Trolox当量比：相当于Trolox的倍数 = T-AOC实测值 / 等浓度Trolox理论值
性能指标
指标 要求
线性范围 0~10μmol Trolox/mL，线性相关系数r≥0.995
最低检测限 ≤0.1μmol Trolox/mL
回收率 90%~110%
批内精密度 CV≤5.0%
批间精密度 CV≤8.0%
稳定性 2-8℃保存12个月，活性保留≥90%
注意事项
样本处理：
样本需新鲜制备，-80℃可保存1个月；避免反复冻融
血清样本避免溶血，溶血会导致结果偏高
样本中不能添加DTT、巯基乙醇等还原剂，也不宜添加Tween、Triton等去垢剂
试剂使用：
ABTS+工作液需临用现配，24小时内用完
标准品需现配现用，避免氧化失效
不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线
测定过程：
反应温度需严格控制在25℃，快速法可在10-37℃范围内反应
若吸光度下降超过50%，需稀释样本后重新测定
每个样本需设置至少3个平行实验，结果取平均值
质量控制：
每次实验需设置空白对照和质控样本
定期校准仪器，确保检测结果准确性
若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确
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