商品属性
产品名称 | 植物花色苷测试盒 | 产品货号 | BH-961176 |
规格 | 100管/96样、50管/48样 | 产品分类 | 氧化与抗氧化系列 |
测试方法 | 微量法、可见分光光度法 | 用途 | 仅供科研实验 |
测定意义与原理
测定意义
花色苷（Anthocyanin）是植物重要的次生代谢产物，具有广泛的生物学功能和应用价值：植物生理功能：参与植物生长发育，调节激素平衡，增强植物抗逆性抗氧化作用：清除体内自由基，预防氧化损伤，延缓衰老抗炎抗菌：抑制炎症反应，增强免疫功能，预防感染食品着色剂：天然安全的食品着色剂，可替代合成色素医疗保健：具有降血脂、降血糖、抗肿瘤等多种保健功能
测定原理
采用pH示差法测定花色苷含量：
当pH为1.0时，花色苷在530nm处有最大吸收峰
当pH为4.5时，花色苷转变为无色查尔酮形式，在530nm处无吸收峰
利用此特性分别测定在不同pH下的530nm和700nm处的吸光度值
计算ΔA = (A530 - A700)pH1.0 - (A530 - A700)pH4.5，ΔA与花色苷浓度成正比
试剂盒组成
组分 规格 作用说明
试剂A 液体20mL×1瓶 含pH1.0氯化钾-盐酸缓冲液，维持酸性反应环境
试剂B 液体20mL×1瓶 含pH4.5乙酸钠-乙酸缓冲液，促进花色苷向查尔酮形式转变
标准品 粉剂×1支 含10mg矢车菊素-3-葡萄糖苷标准品，用于建立标准曲线
标准品稀释液 液体20mL×1瓶 含0.1%盐酸-甲醇溶液，用于稀释标准品
提取液 液体100mL×1瓶 含0.1%盐酸-甲醇溶液，用于植物样本提取
自备仪器与试剂
必备仪器
可见分光光度计/酶标仪（530nm、700nm检测通道）
台式高速离心机（≥10000g）
可调式移液器（0.5-10μL、10-100μL、100-1000μL）
恒温水浴锅（控温精度±0.5℃）
研钵/组织匀浆器
必备耗材
1mL玻璃比色皿/96孔板
离心管（1.5mL、10mL）
一次性无菌吸头
容量瓶（100mL、200mL）
自备试剂
蒸馏水/去离子水
0.1%盐酸-甲醇溶液（作为提取液）
样本前处理方法
新鲜植物组织样本取新鲜植物组织，用蒸馏水冲洗干净，滤纸吸干水分称取约0.1g组织，加入1mL 0.1%盐酸-甲醇溶液，冰浴匀浆4℃避光浸提24h，期间振荡2-3次10000rpm 25℃离心10min，取上清液置冰上待测若花色苷含量过高，可用0.1%盐酸-甲醇溶液稀释1-5倍后测定
干燥植物样本将样本烘干至恒重，粉碎后过40目筛称取约0.05g粉末，加入2mL 0.1%盐酸-甲醇溶液4℃避光浸提24h，10000rpm 25℃离心10min取上清液置冰上待测，若花色苷含量过高，可用0.1%盐酸-甲醇溶液稀释1-5倍后测定
果实/蔬菜样本取新鲜果实/蔬菜，去皮去核，切成小块称取约0.5g样本，加入5mL 0.1%盐酸-甲醇溶液，冰浴匀浆4℃避光浸提12h，10000rpm 25℃离心10min取上清液置冰上待测，若花色苷含量过高，可用0.1%盐酸-甲醇溶液稀释1-5倍后测定
测定操作步骤
标准曲线建立标准品配制：将10mg矢车菊素-3-葡萄糖苷标准品加入1mL标准品稀释液，配制成10mg/mL标准液梯度稀释：将10mg/mL标准液用0.1%盐酸-甲醇溶液稀释成0、0.01、0.02、0.04、0.08、0.16、0.32、0.64mg/mL的标准系列pH1.0条件下测定：取比色管，加入标准品溶液0.5mL + 试剂A 4.5mL，涡旋混匀，室温静置15min，测定530nm和700nm吸光度pH4.5条件下测定：取比色管，加入标准品溶液0.5mL + 试剂B 4.5mL，涡旋混匀，室温静置15min，测定530nm和700nm吸光度计算ΔA：ΔA = (A530 - A700)pH1.0 - (A530 - A700)pH4.5绘制标准曲线：以花色苷浓度为横坐标，ΔA为纵坐标绘制标准曲线
样本测定pH1.0条件下测定：取比色管，加入样本提取液0.5mL + 试剂A 4.5mL，涡旋混匀，室温静置15min，测定530nm和700nm吸光度pH4.5条件下测定：取比色管，加入样本提取液0.5mL + 试剂B 4.5mL，涡旋混匀，室温静置15min，测定530nm和700nm吸光度空白对照：取0.5mL 0.1%盐酸-甲醇溶液，按上述步骤操作，作为空白管计算ΔA：ΔA样 = (A530 - A700)pH1.0样 - (A530 - A700)pH4.5样计算ΔA空白：ΔA空白 = (A530 - A700)pH1.0空白 - (A530 - A700)pH4.5空白
结果计算方法
单位定义
mg/g鲜重：每克植物组织鲜重中花色苷的含量
mg/g干重：每克植物组织干重中花色苷的含量
mg/L：每升样本中花色苷的含量
计算公式
花色苷含量(mg/g鲜重)=(ΔA样−ΔA空白)×C标×V总(ΔA标−ΔA空白标)×W花色苷含量(mg/g鲜重)=(ΔA标−ΔA空白标)×W(ΔA样−ΔA空白)×C标×V总
ΔA样-ΔA空白：样本扣除空白后的ΔA值
C标：标准品浓度（mg/mL）
V总：样本提取液总体积（mL）
ΔA标-ΔA空白标：标准品扣除空白后的ΔA值
W：样本质量（g）
简化公式
按鲜重计算：花色苷（mg/g鲜重）= (ΔA样-ΔA空白)÷(ΔA标-ΔA空白标)×C标×V总÷W
按干重计算：花色苷（mg/g干重）= (ΔA样-ΔA空白)÷(ΔA标-ΔA空白标)×C标×V总÷W干
性能指标
指标 要求
线性范围 0.01~0.64mg/mL，线性相关系数r≥0.995
最低检测限 ≤0.005mg/mL
回收率 90%~110%
批内精密度 CV≤5.0%
批间精密度 CV≤8.0%
稳定性 2-8℃保存12个月，活性保留≥90%
注意事项
样本处理：
样本需新鲜制备，避免花色苷降解；-80℃可保存1个月
提取过程需避光，避免花色苷光解
若样本吸光度不在测量范围内，建议稀释或增加样本量进行检测
试剂使用：
标准品需现配现用，2-8℃可保存四周
缓冲液对温度敏感，配制后需室温平衡30min
不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线
测定过程：
显色完成后需立即测定，2小时后吸光度值会下降
反应时间需严格控制在15min，确保花色苷充分转变
每个样本需设置至少3个平行实验，结果取平均值
质量控制：
每次实验需设置空白对照和质控样本
定期校准仪器，确保检测结果准确性
若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确
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