商品属性
产品名称 | 植物类黄酮测试盒 | 产品货号 | BH-961168 |
规格 | 100管/96样、50管/48样 | 产品分类 | 氧化与抗氧化系列 |
测试方法 | 微量法、可见分光光度法 | 用途 | 仅供科研实验 |
测定意义与原理
测定意义
类黄酮（Flavonoids）是植物重要的次生代谢产物，具有广泛的生物学功能和医疗保健价值：植物生理功能：参与植物生长发育，调节激素平衡，增强植物抗逆性抗氧化作用：清除体内自由基，预防氧化损伤，延缓衰老抗炎抗菌：抑制炎症反应，增强免疫功能，预防感染降血脂：调节血脂代谢，降低胆固醇，预防心血管疾病抗肿瘤：抑制癌细胞生长，诱导细胞凋亡，预防癌症发生
测定原理
采用比色法，在碱性亚硝酸盐溶液中，类黄酮与铝离子形成红色络合物，该络合物在470nm处有最大吸收峰，吸光度与类黄酮浓度成正比： 类黄酮+NaNO2+Al(NO3)3→碱性条件红色络合物(470nm)类黄酮+NaNO2+Al(NO3)3碱性条件红色络合物(470nm)
试剂盒组成
组分 规格 作用说明
试剂A 液体5mL×1瓶 含5% NaNO₂溶液，提供碱性环境并与类黄酮反应
试剂B 液体4mL×1瓶 含10% Al(NO₃)₃溶液，与类黄酮形成红色络合物
试剂C 液体30mL×1瓶 含4% NaOH溶液，调节反应pH值
标准品 粉剂×1支 含10mg芦丁标准品，用于建立标准曲线
标准品稀释液 液体20mL×1瓶 含60%乙醇，用于稀释标准品
自备仪器与试剂
必备仪器
可见分光光度计/酶标仪（470nm检测通道）
台式高速离心机（≥12000g）
可调式移液器（0.5-10μL、10-100μL、100-1000μL）
恒温水浴锅（控温精度±0.5℃）
研钵/组织匀浆器
必备耗材
1mL玻璃比色皿/96孔板
离心管（1.5mL、10mL）
一次性无菌吸头
容量瓶（100mL）
自备试剂
60%乙醇溶液（作为提取液）
蒸馏水/去离子水
样本前处理方法
新鲜植物组织样本取新鲜植物组织，用蒸馏水冲洗干净，滤纸吸干水分称取约0.1g组织，加入1mL 60%乙醇，冰浴匀浆60℃超声提取30min，功率300W12000rpm 25℃离心10min，取上清液置冰上待测若类黄酮含量过高，可用60%乙醇稀释1-5倍后测定
干燥植物样本将样本烘干至恒重，粉碎后过40目筛称取约0.02g粉末，加入2mL 60%乙醇60℃振荡提取2h，10000rpm 25℃离心10min取上清液置冰上待测，若类黄酮含量过高，可用60%乙醇稀释1-5倍后测定
果实/蔬菜样本取新鲜果实/蔬菜，去皮去核，切成小块称取约0.5g样本，加入5mL 60%乙醇，冰浴匀浆60℃超声提取30min，12000rpm 25℃离心10min取上清液置冰上待测，若类黄酮含量过高，可用60%乙醇稀释1-5倍后测定
测定操作步骤
标准曲线建立标准品配制：将10mg芦丁标准品加入1mL标准品稀释液，配制成10mg/mL标准液梯度稀释：将10mg/mL标准液用60%乙醇稀释成0.02、0.039、0.078、0.156、0.3125、0.625、1.25、1.5mg/mL的标准系列显色反应：取比色管，加入标准品溶液0.2mL + 试剂A 0.05mL，涡旋混匀，室温静置5min加入试剂B：向各管加入试剂B 0.05mL，涡旋混匀，室温静置5min加入试剂C：向各管加入试剂C 0.4mL，用蒸馏水定容至2mL吸光度测定：在470nm波长下测定各管吸光度，以类黄酮浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线
样本测定样本处理：取0.2mL样本提取液，加入试剂A 0.05mL，涡旋混匀，室温静置5min加入试剂B：向各管加入试剂B 0.05mL，涡旋混匀，室温静置5min加入试剂C：向各管加入试剂C 0.4mL，用蒸馏水定容至2mL空白对照：取0.2mL 60%乙醇，按上述步骤操作，作为空白管吸光度测定：在470nm波长下测定样本管和空白管的吸光度（A样、A空）
结果计算方法
单位定义
mg/g鲜重：每克植物组织鲜重中类黄酮的含量
mg/g干重：每克植物组织干重中类黄酮的含量
mg/mL：每毫升样本中类黄酮的含量
计算公式
类黄酮含量(mg/g鲜重)=(A样−A空)×C标×V总(A标−A空标)×W类黄酮含量(mg/g鲜重)=(A标−A空标)×W(A样−A空)×C标×V总
A样-A空：样本扣除空白后的吸光度值
C标：标准品浓度（mg/mL）
V总：样本提取液总体积（mL）
A标-A空标：标准品扣除空白后的吸光度值
W：样本质量（g）
简化公式
按鲜重计算：类黄酮（mg/g鲜重）= (A样-A空)÷(A标-A空标)×C标×V总÷W
按干重计算：类黄酮（mg/g干重）= (A样-A空)÷(A标-A空标)×C标×V总÷W
性能指标
指标 要求
线性范围 0.0097-1.75mg/mL，线性相关系数r≥0.995
最低检测限 ≤0.00666mg/mL
回收率 90%~110%
批内精密度 CV≤5.0%
批间精密度 CV≤8.0%
稳定性 2-8℃保存12个月，活性保留≥90%
注意事项
样本处理：
样本需新鲜制备，避免类黄酮降解；-80℃可保存1个月
提取过程需避光，避免类黄酮氧化
若样本吸光度不在测量范围内，建议稀释或增加样本量进行检测
试剂使用：
标准品需现配现用，2-8℃可保存四周
显色剂对光敏感，配制后需避光保存
不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线
测定过程：
显色完成后需立即测定，2小时后吸光度值会下降
反应时间需严格控制在5min，确保显色充分
每个样本需设置至少3个平行实验，结果取平均值
质量控制：
每次实验需设置空白对照和质控样本
定期校准仪器，确保检测结果准确性
若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确
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