淀粉分支酶（SBE）测试盒
测定意义与原理
测定意义
淀粉分支酶（SBE，EC2.4.1.18）主要存在于植物中，是参与支链淀粉合成的关键酶，测定SBE活性在淀粉生物合成、优质农作物品种选育和品质遗传改良研究中具有重要意义。
测定原理
分光光度法/可见分光光度法/微量法：淀粉和碘结合后在660nm有特征光吸收，SBE可切断支链淀粉侧支，从而降低了淀粉-碘复合物在660nm吸收值，一定时间内吸光度下降的百分率可以反映SBE活性。反应式如下： 支链淀粉+碘液→蓝色复合物支链淀粉+碘液→蓝色复合物 蓝色复合物→SBE直链淀粉+碘液蓝色复合物SBE直链淀粉+碘液
试剂盒组成
分光光度法/可见分光光度法/微量法试剂盒
组分 规格 作用说明
提取液 液体60mL×1瓶 用于提取样本中的SBE
试剂一 液体20mL×1瓶 含缓冲液和底物淀粉溶液
试剂二 粉剂×2支 含碘液和碘化钾溶液，临用前每支加入1mL蒸馏水，充分溶解后备用
试剂三 液体25mL×1瓶 含终止液
自备仪器与试剂
必备仪器
分光光度法/可见分光光度法/微量法：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、恒温水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿/96孔板、研钵、电子天平
必备耗材
离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、研钵/组织匀浆器、超声破碎仪
自备试剂：蒸馏水/去离子水、生理盐水
样本前处理方法
植物组织样本取样：称取0.1g样本，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆提取：15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测
种子样本取样：称取0.1g种子，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆提取：15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测
果实样本取样：称取0.1g果实，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆提取：15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测
测定操作步骤
分光光度法/可见分光光度法/微量法操作仪器预热：可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到660nm，蒸馏水调零试剂配制：
试剂二：临用前每支加入1mL蒸馏水，充分溶解后备用样本测定：
试剂名称(μL) 空白管 测定管 灭活对照管
提取液/样本/灭活酶液 100 100 100
试剂一 700 700 700
试剂二 100 100 100
混匀后37℃准确保温20min，95℃水浴1min（盖紧防止水分散失），冷却后加入试剂三100μL，混匀后记录660nm处的吸光值A空白、A测定和A灭活灭活对照制备：将粗酶液95℃水浴1min后灭活，即为灭活对照管标准曲线绘制：将SBE标准品稀释成0、10、20、30、40、50U/L系列浓度，同样处理，测定660nm处的吸光值，绘制标准曲线
结果计算方法
单位定义
U/g 鲜重：每克组织每分钟催化切断1μmol支链淀粉侧支的酶量
U/mg prot：每毫克组织蛋白每分钟催化切断1μmol支链淀粉侧支的酶量
分光光度法/可见分光光度法/微量法计算公式
SBE活性(U/g 鲜重)=(A空白−A测定)−(A空白−A灭活)A空白−A标准×标准品浓度×稀释倍数×V总W×1T×1000SBE活性(U/g 鲜重)=A空白−A标准(A空白−A测定)−(A空白−A灭活)×标准品浓度×稀释倍数×WV总×T1×1000
A测定：样本管吸光度值
A空白：空白管吸光度值
A灭活：灭活对照管吸光度值
A标准：标准管吸光度值
标准品浓度：通常为1U/mL
V总：样本提取液总体积（mL）
W：样本质量（g）
T：反应时间（min）
性能指标
指标 分光光度法/可见分光光度法/微量法
线性范围 0~50U/L
最低检测限 ≤0.1U/L
回收率 90%~110%
批内精密度 CV≤2.2%
批间精密度 CV≤5.0%
稳定性 4℃保存6-12个月
注意事项
样本处理：
样本需新鲜制备，避免SBE失活；-20℃可保存3个月
组织样本需冰浴匀浆，避免酶失活
超声波破碎时需控制功率和时间，避免样本降解
试剂使用：
试剂二临用前配制，避免碘挥发
试剂一如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀
不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线
标准品需4℃保存，避免反复冻融
测定过程：
反应温度需严格控制在37℃
灭活对照管需95℃水浴1min，确保酶完全灭活
95℃水浴时需盖紧防止水分散失
若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定
质量控制：
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
每次实验需设置空白对照和质控样本
定期校准仪器，确保检测结果准确性
若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确
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