商品属性
产品名称 | 脲酶（UE）测试盒 | 产品货号 | BH-9611104 |
规格 | 100管/48样、50管/24样 | 产品分类 | 氮代谢系列 |
测试方法 | 微量法、可见分光光度法 | 用途 | 仅供科研实验 |
测定意义与原理
测定意义
脲酶（UE）广泛存在于土壤、植物和微生物中，其测定具有重要的环境和农业意义：土壤肥力评估：脲酶活性与土壤氮素转化能力密切相关，可作为土壤肥力指标农业生产：指导氮肥管理，提高氮肥利用率环境监测：评估土壤和水体的氮素污染程度生物学研究：了解植物氮代谢机制和微生物功能食品检测：检测食品中脲酶活性，判断食品质量
测定原理
靛酚蓝比色法
脲酶催化尿素水解生成氨和二氧化碳，氨在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚反应，生成靛酚蓝染料，在625nm波长下有最大吸收峰，其吸光度与脲酶活性成正比。反应式如下： CO(NH2)2+H2O→脲酶2NH3+CO2CO(NH2)2+H2O脲酶2NH3+CO2 NH3+OCl−+C6H5OH→催化剂靛酚蓝+H2ONH3+OCl−+C6H5OH催化剂靛酚蓝+H2O
纳氏试剂比色法
脲酶催化尿素水解生成氨，氨与纳氏试剂反应生成淡黄棕色胶态化合物，其吸光度与脲酶活性成正比，在420nm波长处测定。反应式如下： CO(NH2)2+H2O→脲酶2NH3+CO2CO(NH2)2+H2O脲酶2NH3+CO2 NH3+2[HgI4]2−+4OH−→Hg2NI⋅H2O↓+7I−+3H2ONH3+2[HgI4]2−+4OH−→Hg2NI⋅H2O↓+7I−+3H2O
试剂盒组成
组分 规格 作用说明
提取液 液体100mL×1瓶 含Tris-HCl缓冲液（pH8.0），用于提取样本中的脲酶
试剂A 液体25mL×1瓶 含尿素溶液，脲酶反应底物
试剂B 液体25mL×1瓶 含苯酚和次氯酸钠溶液，靛酚蓝显色液
试剂C 液体25mL×1瓶 含催化剂溶液，加速显色反应
试剂D 液体25mL×1瓶 含纳氏试剂，纳氏比色法显色剂
标准品 液体1mL×1支 含100mg/L NH₄Cl标准品，用于建立标准曲线
自备仪器与试剂
必备仪器
分光光度法：可见分光光度计（625nm/420nm检测通道）、1mL玻璃比色皿
通用：电子天平（精度0.01g）、研钵/组织匀浆器、恒温水浴锅、可调式移液器
现场检测：快速检测盒、一次性采样管、便携式比色计
必备耗材
离心管（1.5mL/10mL）、一次性吸头、研钵/组织匀浆器
自备试剂：蒸馏水/去离子水、无氨水、活性炭
样本前处理方法
植物组织样本取样：取新鲜植物叶片、根系或茎秆，用蒸馏水洗净表面泥土，用滤纸吸干称重：称取0.1-0.5g样品，剪碎后置于研钵中研磨：加入5mL提取液，冰浴研磨成匀浆离心：8000g 4℃离心10min，取上清液置冰上待测稀释：若脲酶活性过高，用提取液稀释1-10倍后测定
土壤样本取样：取新鲜土壤样品，风干后过2mm筛提取：称取1g土壤，加入5mL提取液，振荡提取30min过滤：用滤纸过滤，取滤液备用保存：若不立即测定，滤液需置于4℃冷藏保存
水体样本取样：用干净玻璃瓶采集水样，避免曝气过滤：若水样浑浊，用0.45μm滤膜过滤保存：每升水样加入0.8mL浓硫酸，调节pH<2，4℃冷藏保存
测定操作步骤
靛酚蓝比色法操作仪器预热：分光光度计预热30min以上，调节波长至625nm，蒸馏水调零样本测定：
取比色管，加入0.5mL样本 + 0.5mL试剂A，37℃水浴30min
加入1.0mL试剂B和1.0mL试剂C，混匀，37℃水浴30min
取出冷却至室温，测定625nm波长下的吸光度空白对照：取0.5mL提取液替代样本，同样处理标准曲线绘制：将标准品稀释成0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6mg/L系列浓度，同样处理
纳氏试剂比色法操作仪器预热：分光光度计预热30min以上，调节波长至420nm，蒸馏水调零样本测定：
取比色管，加入0.5mL样本 + 0.5mL试剂A，37℃水浴30min
加入1.0mL试剂D，定容至10mL，混匀，室温放置10min
测定420nm波长下的吸光度空白对照：取0.5mL提取液替代样本，同样处理标准曲线绘制：将标准品稀释成0、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4mg/L系列浓度，同样处理
结果计算方法
单位定义
U/g 鲜重：每克鲜重样本每分钟催化生成1μmol氨的酶量
U/g 干土：每克干土每天催化生成1μmol氨的酶量
U/L：每升水体每分钟催化生成1μmol氨的酶量
靛酚蓝比色法计算公式
脲酶活性(U/g鲜重)=(A测定−A空白)×C标×V总(A标准−A空白)×m×t×1000脲酶活性(U/g鲜重)=(A标准−A空白)×m×t×1000(A测定−A空白)×C标×V总
A测定：样本管吸光度值
A空白：空白管吸光度值
A标准：标准管吸光度值
C标：标准品浓度（mg/L）
V总：样本提取液总体积（mL）
m：样本质量（g）
t：反应时间（min）
简化公式
当反应时间30min，标准品浓度1mg/L时： 脲酶活性(U/g鲜重)=(A测定−A空白)×1×V总(A标准−A空白)×m×30×1000脲酶活性(U/g鲜重)=(A标准−A空白)×m×30×1000(A测定−A空白)×1×V总
性能指标
指标 靛酚蓝法 纳氏试剂法
线性范围 0~2U/mL 0~10U/mL
最低检测限 ≤0.01U/mL ≤0.05U/mL
回收率 90%~110% 90%~110%
批内精密度 CV≤3.0% CV≤5.0%
批间精密度 CV≤5.0% CV≤8.0%
稳定性 2-8℃保存12个月 2-8℃保存12个月
注意事项
样本处理：
样本需新鲜制备，避免脲酶失活；-20℃可保存3个月
植物样本需洗净表面泥土，避免土壤污染
水体样本需避免曝气，防止氨挥发
试剂使用：
靛酚蓝显色液需现配现用，避免反应失效
纳氏试剂需避光保存，避免生成沉淀
不同批号试剂不能混用，需重新绘制标准曲线
测定过程：
反应温度需严格控制在37℃，反应时间30分钟
靛酚蓝法反应需在强碱性条件下进行，确保反应完全
若吸光度值超出线性范围，需稀释样本后重新测定
质量控制：
每次实验需设置空白对照和质控样本
定期校准仪器，确保检测结果准确性
若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确
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