产品介绍:
产品性质与用途
检测目标:专门用于检测 GUS基因(β-葡萄糖苷酸酶基因,β-glucuronidase)。
应用背景:GUS基因来源于大肠杆菌(E. coli),在绝大多数植物中没有内源性背景活性。因此,它被广泛用作报告基因(Reporter Gene),用于研究基因表达调控、启动子活性分析以及筛选转基因植株。
产品名称 | GUS基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) | 货号 | AP3405 |
产品分类 | 荧光PCR | 规格 | 48T |
主要用途:用于科研领域(仅限于实验室研究,非临床诊断),检测植物组织、细胞或微生物样本中是否含有GUS基因片段。
技术原理:采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术,基于TaqMan荧光探针法。
优势:相比传统的组织化学染色法(X-Gluc法),PCR法具有更高的灵敏度和特异性,能够进行绝对定量或相对定量分析,且不受样本背景颜色干扰。
操作流程与关键参数
根据参考材料,操作通常包括以下步骤:
步骤 操作内容 关键参数/注意事项
1. 样本制备 从待测样本(如植物叶片、组织)中提取基因组DNA。 建议使用配套的植物基因组DNA提取试剂盒,确保DNA纯度。
2. 试剂配制 将PCR反应液(含酶、dNTPs等)与引物探针混合。 需在冰上操作,避光保存反应液。
3. 加样 向反应管中加入DNA模板(通常为5μL)。 必须设置对照:阴性对照(无菌水/NG)和阳性对照(含GUS基因的质粒/PG)。
4. 扩增反应 在荧光定量PCR仪上运行程序。 荧光基团:FAM(通常)
淬灭基团:TAMRA
循环条件:95℃预变性10分钟;随后40个循环(95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟)。
5. 结果判读 分析扩增曲线和Ct值。 阳性:Ct值≤36,扩增曲线呈典型“S”型。
阴性:Ct值≥40或无Ct值(曲线为直线)。
可疑:36<Ct值<40,需重复实验。
性能特点
高特异性:利用特异性探针,仅针对GUS基因片段进行扩增。
灵敏度:能够检测出极低拷贝数的GUS基因。
注意事项:该产品仅可用于科研实验,严禁用于临床诊断或其他非科研用途。不同批号的试剂请勿混用。
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注意事项
实验操作规范
严格分区操作:试剂配制区、样本处理区、扩增区需物理隔离,防止气溶胶污染。
每次实验需设置阴性对照(无模板DNA)、阳性对照(已知PAT基因样本)及空白对照(仅缓冲液)。
加样时避免过量或不足,推荐低容量反应管以提高热传导率。
污染防控
定期监测实验室空气、加样枪及仪器表面污染,可通过擦拭采样后扩增验证。
扩增产物需在专用区域处理,避免开盖时形成气溶胶污染。
关键字: GUS;基因 ; PCR-荧光探针法;核酸检测试剂盒;
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