产品介绍:

检测原理与核心优势
该试剂盒采用的是实时荧光定量PCR(qPCR)技术,具体为TaqMan荧光探针法。
核心原理:针对转基因玉米DBT418品系特有的外源基因插入位点序列(即品系特异序列,Event-specific sequence)设计特异性引物和TaqMan探针。探针上连接有荧光报告基团(如FAM)和荧光淬灭基团。在PCR扩增过程中,随着目标DNA的指数级扩增,探针被特异性切断,荧光信号随之释放并被仪器实时捕捉。
产品名称 | 转基因玉米品系DBT418核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) |
产品分类 | 荧光PCR |
规格 | 48T |
货号 | AP3428 |
高特异性:能够精准识别DBT418品系,与非转基因玉米及其他转基因品系无交叉反应。
主要优势:

高特异性:所有引物均经过详尽的生物信息学分析及庞大数据库比对,确保种属及品系特异性,特异性达到100%。
高灵敏度:检出限可达10³ cfu/ml或0.1%(相对于内源基因),能够检测出极低含量的DBT418成分,且无需繁琐的增菌过程。
高重现性:经过大量实验菌株验证,重现性为100%。
�� 产品性能指标

根据相关产品信息及标准研制情况,该试剂盒通常具备以下指标:
指标项目 性能参数参考
检测范围 2×10³ ~ 1×10⁸ 拷贝/毫升 (Copies/mL)
最低检测限 1×10³ 拷贝/毫升 (Copies/mL) 或 0.1% (w/w)
反应体系 20-25 μL
适用仪器 ABI 7500, Bio-Rad CFX96, Roche 480等实时荧光定量PCR仪
适用样本 玉米植株、种子、玉米粉、饲料、深加工食品等。
�� 主要组分与储存

试剂盒通常包含以下组分(以48T规格为例):
DBT418 PCR反应液:预混了dNTPs、缓冲液、Mg²⁺等。
引物探针混合液:针对DBT418特异序列设计的引物和探针。
阳性对照:含有DBT418基因片段的质粒或标准DNA。
阴性对照:无模板对照(NTC)或非转基因玉米DNA。
储存条件:所有组分应于 -20℃ 条件下避光保存,运输过程需使用干冰或冰袋。避免反复冻融,使用前需完全解冻并混匀。
�� 标准操作流程

样本处理与DNA提取
采集待检测的玉米植株、种子或加工食品样本。
参照《GB/T 19495.3-2004》或其他标准方法,提取样本的基因组DNA作为模板。
试剂准备
将试剂完全解冻,各组分在使用前需涡旋混匀,并瞬时离心。
计算所需反应管数量(待检样品数 + 阴性对照 + 阳性对照)。
反应体系配置
在冰上操作,按说明书比例配制反应体系。通常按以下比例混合反应液、酶液和模板DNA。
上机扩增与检测
将配置好的反应管放入荧光定量PCR仪中。
设置好荧光通道(通常为FAM)、反应程序并运行。
结果判读
阳性:Ct值 ≤ 35,且扩增曲线呈典型的“S”型增长。
可疑:Ct值在 35-40 之间,建议复测,若复测结果一致且对照正常,报告为阳性。
阴性:Ct值 > 40 或无Ct值,曲线为直线。
⚠️ 注意事项

防止污染:实验应严格分区(试剂准备区、样本制备区、扩增区),避免气溶胶污染。反应结束后严禁开盖,应直接丢弃入密封袋中处理。
操作规范:试剂配制和加样步骤建议在冰上进行,避免酶活性损失。反应液对光敏感,应避光保存和使用。
质控要求:每次实验必须设置阴性对照(无模板)和阳性对照。若阴性对照出现阳性扩增或阳性对照无扩增,则本次实验结果无效。
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注意事项:

防污染操作
需在试剂准备区、样本处理区、扩增区独立操作,使用带滤芯吸头及专用实验服。
阳性对照管理
浓度高达1×10⁸拷贝/μL,需单独存放并避免污染其他试剂。
局限性
仅限科研使用,不可用于临床诊断;
环境样本中可能存在PCR抑制剂,需设置内参对照。
关键字: 转基因玉米品系;DBT418;核酸检测试剂盒; PCR-荧光探针法;
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