转基因水稻品系Kefeng6核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

 产品介绍：

检测原理与目的

检测原理：基于 实时荧光定量 PCR（qPCR） 技术。试剂盒中包含针对 Kefeng6 品系特异性设计的引物和 TaqMan 探针。在 PCR 扩增过程中，随着目标 DNA 片段的指数级扩增，探针被酶切降解，释放出荧光信号。仪器实时监测荧光信号的累积，并根据 Ct 值（循环阈值） 进行定性或定量分析。

核心目的：用于食品、饲料、农作物植株等样品中 Kefeng6 转基因水稻品系 的高特异性检测。

特异性鉴定：专一性地检测样品中是否含有 Kefeng6 品系。

定量分析：通过建立标准曲线，计算样品中 Kefeng6 品系的拷贝数或占总水稻基因组的百分比。

�� 产品核心参数与组成

项目  详细信息

检测方法  实时荧光定量 PCR (TaqMan 探针法)

检测靶标  转基因水稻品系 Kefeng6

产品规格  48T (即 48 次测试)

检测限  最低检测限可达 0.1% (部分产品可达 10-100 拷贝/反应)

主要组分  PCR 反应液 (含引物、探针、dNTPs 等)、酶混合液 (Taq 酶等)、

阳性质控品 (含 Kefeng6 序列的 DNA/质粒)、阴性质控品 (无菌水)

��️ 操作流程

样本处理：提取待测样本（如水稻叶片、米粉、稻谷、饲料等）的基因组 DNA。

试剂准备：在冰上将 PCR 反应液和酶混合液按说明书比例混合，配制成预混液。

加样：将配制好的预混液分装到 PCR 管/板中，然后加入 DNA 模板，同时设置阳性和阴性对照。

荧光 PCR 扩增：将反应体系放入荧光定量 PCR 仪中，设置反应程序（通常为 95℃ 预变性，然后进行 40 个左右的扩增循环）。

结果分析：仪器自动根据荧光信号和 Ct 值判断结果。

�� 结果判读标准

结果判读主要依据扩增曲线形态和 Ct 值（具体阈值请以说明书为准）：

结果类型  判读标准  解释

阳性 (+)  扩增曲线呈典型的“S”型，且 Ct 值 < 阈值 (如 35)。  样品中检测到 Kefeng6 基因片段，判定为 转基因阳性。

阴性 (-)  无 Ct 值，或 Ct 值 ≥ 阈值，曲线为直线或无指数增长期。  样品中未检测到 Kefeng6 基因片段，判定为 阴性。

无效  阳性对照未出现扩增曲线，或阴性对照出现扩增曲线。  实验失败（可能存在试剂失效或污染），结果无效，需重做。

⚠️ 注意事项

防止污染：由于 qPCR 灵敏度极高，极易受气溶胶污染影响。建议实验分区操作（试剂准备区、样本制备区、扩增区），并使用带滤芯的枪头。

避光保存：反应液中的荧光探针成分对光敏感，试剂应 -20℃ 避光 保存，使用前避免长时间暴露在强光下。

内源基因检测：为了确保检测结果的准确性（排除假阴性），建议同时使用 水稻内源基因检测试剂盒（如水稻 Sps 基因、Actin 基因或 Zein 基因）对样本进行检测，以确认样本 DNA 提取成功且无 PCR 抑制物。

对照设置：每次检测必须严格设置阳性和阴性对照，以确保实验结果的准确性和可靠性。

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实验操作规范

严格分区操作：试剂配制区、样本处理区、扩增区需物理隔离，防止气溶胶污染。

每次实验需设置阴性对照（无模板DNA）、阳性对照（已知PAT基因样本）及空白对照（仅缓冲液）。

加样时避免过量或不足，推荐低容量反应管以提高热传导率。

污染防控

定期监测实验室空气、加样枪及仪器表面污染，可通过擦拭采样后扩增验证。

扩增产物需在专用区域处理，避免开盖时形成气溶胶污染。