产品介绍:
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)核酸检测试剂盒是一种用于体外定性检测临床样本中MRSA特异性核酸的分子诊断工具。该试剂盒主要用于快速鉴别金黄色葡萄球菌是否为耐药株(MRSA),其核心原理是基于实时荧光PCR(聚合酶链式反应)技术。
产品名称 | 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌( MRSA)核酸检测试剂盒 |
产品分类 | 荧光PCR |
规格 | 50T |
货号 | AP3100 |
检测原理
该试剂盒通常采用多重实时荧光PCR法(TaqMan探针法),通过检测两个关键基因来同时鉴定菌种和耐药性:
检测靶标:
mecA 基因(耐药基因): 这是MRSA耐药的“金标准”分子标志。mecA基因编码低亲和力的青霉素结合蛋白PBP2a,导致细菌对β-内酰胺类抗生素(如甲氧西林、苯唑西林等)耐药。
nuc 基因(特异性基因): 这是金黄色葡萄球菌特有的耐热核酸酶基因,用于确认样本中是否存在金黄色葡萄球菌。
双重检测逻辑:
试剂盒通常设计为在一个反应管内同时扩增这两个基因。
如果检测到 nuc 基因阳性且 mecA 基因阳性,则判定为 MRSA(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)。
如果仅 nuc 基因阳性而 mecA 基因阴性,则判定为MSSA(甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌)。
�� 典型性能参数
参数指标 典型数值/范围 说明
检测目标 mecA 基因 + nuc 基因 双重靶标确保准确性
检测方法 荧光PCR法(探针法) 特异性高,闭管操作
检测限 1×10³ ~ 1×10⁴ 拷贝/mL 灵敏度高
检测时间 60 ~ 90 分钟 远快于传统培养法(24-48小时)
储存条件 -20℃ ±5℃ 避光保存 有效期通常为6-12个月
�� 样本类型
鼻拭子(首选): 用于筛查患者是否携带MRSA(鼻前庭是金黄色葡萄球菌的主要定植部位)。
伤口分泌物/脓液: 用于诊断皮肤软组织感染。
痰液/支气管肺泡灌洗液: 用于诊断呼吸道感染。
血液: 用于血流感染的辅助诊断(需结合血培养)。
�� 操作流程简述
样本采集与前处理: 使用无菌拭子采集样本,进行增菌培养(可选)或直接裂解。
核酸提取: 使用配套的细菌DNA提取试剂盒提取总DNA。
配置反应体系: 将提取的DNA、PCR反应液(含引物、探针、酶)按比例混合。
上机检测: 放入实时荧光PCR仪,设置好荧光通道(通常FAM检测nuc,VIC/HEX检测mecA)。
结果分析: 根据扩增曲线的Ct值自动判读结果。
⚠️ 注意事项
临床意义: MRSA是医院感染的重要病原菌,具有多重耐药性。早期快速诊断有助于及时隔离患者、防止院内爆发流行,并指导临床使用万古霉素、利奈唑胺等特效抗生素,避免滥用药物。
生物安全: 操作应在生物安全二级(BSL-2)实验室进行。
结果解读: 虽然PCR检测速度快,但极少数MRSA菌株可能携带mecA的同源基因mecC或存在其他耐药机制(如PBP改变),可能导致假阴性。因此,检测结果应结合传统药敏试验结果和患者临床症状综合判断。
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注意事项:
1、严防污染
分区操作:必须在独立的生物安全柜内进行样本处理、试剂配制和加样,避免气溶胶交叉污染。
专用耗材:使用无核酸酶的枪头、EP管等,建议使用带滤芯枪头。
规范操作:加样后立即盖紧管盖,避免试剂外溅。
2、保证质量
样本处理:样本采集后应立即冷藏(2-8℃),长期保存需置于-70℃以下,避免反复冻融。
试剂保存:严格按照说明书要求的温度(通常是-20℃或2-8℃)保存试剂,避免反复冻融。
对照设置:每次实验必须设置阳性对照、阴性对照和空白对照,监控实验有效性。
3、注意安全
生物安全:阳性样本需按生物安全三级标准处理,实验人员需佩戴个人防护装备(PPE)。
废弃物处理:所有废弃物(包括耗材、样本)需经121℃高压灭菌30分钟后方可丢弃
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