产品介绍：
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）核酸检测试剂盒是一种用于体外定性检测金黄色葡萄球菌核酸的分子诊断产品。该试剂盒主要用于快速识别临床样本或环境样本中是否存在金黄色葡萄球菌的DNA，是诊断金黄色葡萄球菌感染及进行食品安全检测的重要工具。
产品名称 | 金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒 | 货号 | AP3142 |
产品分类 | 荧光PCR | 规格 | 50T |
检测原理
该试剂盒主要基于实时荧光PCR技术（TaqMan探针法）或恒温荧光法（LAMP技术）。
实时荧光PCR法（主流）：
针对金黄色葡萄球菌的特异性基因（如耐热核酸酶基因 nuc、16S rRNA 基因或 femA 基因）设计特异性的引物和荧光探针（通常标记FAM荧光素）。
在PCR扩增过程中，随着目标DNA片段的指数级扩增，荧光信号也随之增强。仪器实时监测荧光信号的变化，根据Ct值（循环阈值）自动判读结果。
恒温荧光法（LAMP）：
针对靶基因的6个特定区段设计多组引物，在恒温条件下（通常60-65℃）进行扩增。
扩增过程中产生大量焦磷酸镁白色沉淀或荧光信号，可通过浊度、荧光或肉眼观察颜色变化来判读结果。
核心组成
试剂盒（以常见的48T/50T规格为例）通常包含：
PCR反应液/预混液：含缓冲液、dNTPs、特异性引物和荧光标记探针。
酶混合液：含热启动Taq DNA聚合酶（PCR法）或Bst DNA聚合酶（LAMP法）。
阳性对照：含有金黄色葡萄球菌目标基因片段的质粒或灭活菌液。
阴性对照：无核酸酶的水。
内标（部分试剂盒包含）：用于监控反应体系是否正常。
适用样本与操作流程
适用样本类型：
临床样本：血液、痰液、咽拭子、脓液、尿液等（用于诊断肺炎、败血症、皮肤感染等）。
食品样本：乳制品、肉制品、糕点等（用于食品安全检测）。
环境样本：水样、物体表面拭子等。
标准操作流程：
样本前处理：
液体样本：离心取沉淀。
固体/食品样本：需进行均质、增菌培养。
细菌培养物：挑取单克隆菌落进行裂解。
DNA提取：使用试剂盒提取细菌基因组DNA（部分快速试剂盒可直接使用煮沸后的菌液上清）。
体系配置：将DNA模板、PCR反应液和酶液按比例混合。
上机扩增：在荧光定量PCR仪或恒温荧光检测仪上运行程序。
结果分析：根据扩增曲线的Ct值判定结果（如Ct≤35-40判为阳性）。
✨ 产品特点
快速高效：相比传统的细菌培养法（需24-48小时），PCR法可在2-3小时内出结果，恒温荧光法甚至可在30-60分钟内完成检测。
高特异性与灵敏度：最低检测限通常可达 10³ copies/mL 或 10-100 CFU/Test，能够特异性区分金黄色葡萄球菌与其他葡萄球菌（如表皮葡萄球菌）。
操作简便：特别是恒温荧光法，无需复杂的热循环仪，部分冻干型试剂盒一管式操作，肉眼可判读。
⚠️ 注意事项与储存
储存条件：试剂盒需在 -20℃ 条件下避光保存（部分恒温法冻干试剂盒可常温保存），避免反复冻融。
有效期：一般为12个月。
防止污染：必须严格分区操作，防止气溶胶污染导致假阳性。
结果解读：阳性结果提示存在金黄色葡萄球菌核酸，需结合临床症状判断是定植还是感染。
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操作步骤：
整个流程遵循“样本处理 → 试剂配制 → 加样 → 上机检测 → 结果分析”的逻辑，核心是防污染和精准操作。
1. 样本处理 (核酸提取)
样本：鼻咽拭子、咽拭子或痰液样本。
裂解：将拭子浸入裂解液，充分混匀后室温静置10分钟。
提取：采用磁珠法或离心柱法提取总RNA，严格按照试剂盒说明书操作。
保存：洗脱后的RNA应立即使用或分装保存于-80℃。
2. 试剂配制与加样
反应体系准备：在试剂准备区配制Master Mix。根据待检测样本数计算总体积，通常按样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照的原则来配制。
推荐体系：例如，使用20μL体系的试剂盒，可包含qPCR预混液16μL、引物探针混合液4μL（具体体积请以实际说明书为准）。
分装：将配好的反应体系分装至PCR反应管中（如20μL/管）。
加样：在样本处理区，分别向反应管中加入5μL的模板RNA（样本、阳性质控、阴性质控）。盖紧管盖，短暂离心，避免污染和气泡。
3. 上机检测
运行程序：将反应管放入荧光定量PCR仪，运行预设程序。典型程序包括：
逆转录：50℃，15分钟（将RNA逆转录为cDNA）。
预变性：95℃，10分钟（激活Hot-Start Taq酶）。
扩增循环：通常为40个循环，每个循环包括变性（95℃，15秒） 和 退火/延伸（60℃，45秒），仪器在退火/延伸步骤同时采集荧光信号。
信号监测：仪器实时监测荧光信号变化，生成扩增曲线。
4. 结果分析与判定
Ct值：仪器根据荧光曲线自动计算阈值循环数（Ct值）。
结果判定：
阳性：样本Ct值 ≤ 37（具体阈值请以试剂盒说明书为准），且扩增曲线呈典型"S"型。
阴性：样本无Ct值或Ct值 > 40。
无效：阳性对照无Ct值或Ct值 > 35，或阴性对照有Ct值，需重新检测。
关键字： 金黄色葡萄球菌;检测试剂盒;
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