产品介绍：
十种细菌性腹泻病原体核酸检测试剂盒是一种用于体外定性检测多种常见肠道致病菌的分子诊断工具。该试剂盒采用多重荧光PCR技术，能够在一个反应体系中同时筛查10种（或更多）引起细菌性腹泻的主要病原体，大大提高了检测效率，缩短了报告时间，特别适用于聚集性疫情的快速排查和临床鉴别诊断。
产品名称 | 十种细菌性腹泻病原体核酸检测试剂盒 | 货号 | AP3107 |
产品分类 | 荧光PCR | 规格 | 50T |
�� 试剂盒核心原理
该试剂盒基于多重实时荧光定量PCR（Multiplex qPCR）技术。
核酸提取：从粪便或肛拭子样本中提取总DNA（部分病毒如诺如病毒需提取RNA并反转录为cDNA）。
多重扩增：在同一个PCR反应管中，利用多组特异性引物和探针（标记不同荧光基团，如FAM、VIC、ROX等），同时对10种目标病原体的保守基因序列进行扩增。
结果判读：仪器根据不同的荧光通道信号，区分并判定具体是哪一种或哪几种病原体呈阳性。
�� 典型检测范围（靶标）
不同的厂家试剂盒组合可能略有差异，但通常包含以下10种最常见的致泻性细菌：
沙门菌 (Salmonella)
志贺菌 (Shigella)
副溶血性弧菌 (Vibrio parahaemolyticus)
霍乱弧菌 (Vibrio cholerae)
大肠埃希菌 O157 (E. coli O157)
小肠结肠炎耶尔森菌 (Yersinia enterocolitica)
空肠弯曲菌 (Campylobacter jejuni)
单核细胞增生李斯特菌 (Listeria monocytogenes)
阪崎肠杆菌 (Cronobacter sakazakii)
金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus) 或 蜡样芽孢杆菌 (Bacillus cereus)
(注：部分试剂盒可能将“致泻性大肠杆菌”细分为ETEC、EPEC、EAEC等，或包含艰难梭菌)
�� 典型产品参数
参数项 典型指标/说明
通用名称 十种细菌性腹泻病原体核酸检测试剂盒（荧光PCR法）
检测方法 多重实时荧光PCR（TaqMan探针法）
样本类型 粪便、肛拭子、增菌液（培养物）
检测时长 约 1.5 - 2 小时
灵敏度 最低检测限通常可达 10² - 10³ CFU/mL
储存条件 -20℃ 避光保存，有效期12个月
组成成分
多重PCR反应液：预混好的引物、探针、dNTPs、Mg²⁺。
酶混合物：热启动Taq酶（部分含UNG酶防污染）。
阳性对照：含有上述10种病原体目的基因的质粒混合物（或灭活菌液）。
阴性对照：无核酸酶水。
内标（部分试剂盒包含）：用于监控提取和扩增过程。
�� 注意事项与临床意义
高效率与高通量：传统培养法检测这10种菌需要多种培养基和繁琐步骤，耗时3-5天；而PCR法可在数小时内出结果，且只需少量样本，非常适合急诊和大规模筛查。
“死菌”检测：PCR检测的是DNA，无法区分细菌是死是活。因此，治疗后的患者可能仍呈阳性，需结合临床症状判断是否治愈。
定植与感染：部分细菌（如金黄色葡萄球菌）可能是肠道暂住菌，阳性结果需结合白细胞、临床症状（发热、腹痛、脓血便）综合判断是否为致病菌。
局限性：PCR法通常不提供药敏结果。若需指导用药，对于PCR阳性的样本，通常仍需进行细菌培养和药敏试验。
生物安全：粪便样本含有大量微生物，处理时应在生物安全柜中进行，做好个人防护。
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操作步骤：
整个流程遵循“样本处理 → 试剂配制 → 加样 → 上机检测 → 结果分析”的逻辑，核心是防污染和精准操作。
1. 样本处理 (核酸提取)
样本：鼻咽拭子、咽拭子或痰液样本。
裂解：将拭子浸入裂解液，充分混匀后室温静置10分钟。
提取：采用磁珠法或离心柱法提取总RNA，严格按照试剂盒说明书操作。
保存：洗脱后的RNA应立即使用或分装保存于-80℃。
2. 试剂配制与加样
反应体系准备：在试剂准备区配制Master Mix。根据待检测样本数计算总体积，通常按样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照的原则来配制。
推荐体系：例如，使用20μL体系的试剂盒，可包含qPCR预混液16μL、引物探针混合液4μL（具体体积请以实际说明书为准）。
分装：将配好的反应体系分装至PCR反应管中（如20μL/管）。
加样：在样本处理区，分别向反应管中加入5μL的模板RNA（样本、阳性质控、阴性质控）。盖紧管盖，短暂离心，避免污染和气泡。
3. 上机检测
运行程序：将反应管放入荧光定量PCR仪，运行预设程序。典型程序包括：
逆转录：50℃，15分钟（将RNA逆转录为cDNA）。
预变性：95℃，10分钟（激活Hot-Start Taq酶）。
扩增循环：通常为40个循环，每个循环包括变性（95℃，15秒） 和 退火/延伸（60℃，45秒），仪器在退火/延伸步骤同时采集荧光信号。
信号监测：仪器实时监测荧光信号变化，生成扩增曲线。
4. 结果分析与判定
Ct值：仪器根据荧光曲线自动计算阈值循环数（Ct值）。
结果判定：
阳性：样本Ct值 ≤ 37（具体阈值请以试剂盒说明书为准），且扩增曲线呈典型"S"型。
阴性：样本无Ct值或Ct值 > 40。
无效：阳性对照无Ct值或Ct值 > 35，或阴性对照有Ct值，需重新检测。
关键字： 十种细菌性腹泻病原体;检测试剂盒;
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