产品介绍：
A组轮状病毒（RVA）及基因分型核酸检测试剂盒是一种用于体外定性检测临床粪便样本中A组轮状病毒核酸，并对其主要基因型（G型和P型）进行分型的分子诊断工具。该试剂盒主要用于婴幼儿腹泻、病毒性胃肠炎的病原学诊断及流行病学监测。
产品名称 | A 组轮状病毒及基因分型核酸检测试剂盒 |
产品分类 | 荧光PCR |
规格 | 50T |
货号 | AP3108 |
检测原理
该试剂盒通常基于逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术，由于轮状病毒是RNA病毒，检测分为两步：
反转录（RT）： 将样本中的病毒RNA逆转录成cDNA。
多重/套式PCR扩增：
定性检测： 针对A组轮状病毒的组特异性基因（通常是内壳蛋白基因VP6）设计引物，确认是否存在A组轮状病毒感染。
基因分型： 针对决定病毒血清型的两个主要基因进行扩增分型：
G基因型分型： 针对编码外壳糖蛋白的VP7基因进行扩增，区分G1、G2、G3、G4、G9等常见流行型。
P基因型分型： 针对编码外壳蛋白的VP4基因进行扩增，区分P[4]、P[6]、P[8]等型。
方法： 常采用多重RT-PCR或套式PCR（Nested PCR）技术，通过电泳条带大小或特异性探针信号来判断基因型。
�� 典型性能参数
根据行业标准及主流科研/监测用试剂盒（如重大专项传染病监测技术平台方案）的信息，参考参数如下：
参数指标 典型数值/范围 说明
检测目标 VP6 (定性), VP7 (G型), VP4 (P型) 靶向A组轮状病毒特异性基因
检测方法 逆转录-PCR (RT-PCR) / 荧光PCR 需先将RNA逆转录为cDNA
检测限 1×10³ ～ 1×10⁴ 拷贝/mL 灵敏度高，优于电镜和胶体金法
分型能力 G型 (G1-4, G9等), P型 (P[4], P[6], P[8]等) 覆盖主要流行基因型
检测时间 4 ～ 6 小时 包含核酸提取和两轮PCR扩增
储存条件 -20℃ 避光保存 酶制剂对温度敏感
�� 样本类型
粪便标本（主要）： 患者急性期（发病3-5天内）的新鲜粪便或粪便悬液。
肛拭子： 用于不便留取粪便的婴幼儿。
�� 操作流程简述
样本前处理： 取粪便样本加入PBS缓冲液，涡旋震荡混匀，离心取上清。
核酸提取： 提取病毒RNA（通常使用异硫氰酸胍或磁珠法）。
逆转录与PCR扩增：
第一步： 将RNA逆转录为cDNA。
第二步（定性）： 扩增VP6基因确认感染。
第三步（分型）： 分别扩增VP7（G型）和VP4（P型）基因。
结果判读：
定性： 出现特异性扩增曲线或电泳条带判为阳性。
分型： 根据电泳条带的大小（bp）或测序结果对应到具体的G型和P型。
⚠️ 注意事项
临床与流行病学意义： A组轮状病毒是引起婴幼儿重症腹泻的主要病原体。基因分型对于疫苗效果评估（如轮状病毒疫苗主要针对G1-G4, P[8]型）和追踪病毒变异（如G9型的流行）具有重要意义。
生物安全： 粪便样本含有多种病原体，操作应在生物安全二级（BSL-2）实验室进行。
操作复杂度： 相比普通的“一步法”核酸检测试剂盒，基因分型试剂盒操作步骤繁琐（通常涉及套式PCR或多重PCR），对实验操作技术和防污染要求极高，一般仅在疾控中心（CDC）或高级别医学实验室使用，较少用于普通医院的临床即时诊断。
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注意事项：
1、严防污染
分区操作：必须在独立的生物安全柜内进行样本处理、试剂配制和加样，避免气溶胶交叉污染。
专用耗材：使用无核酸酶的枪头、EP管等，建议使用带滤芯枪头。
规范操作：加样后立即盖紧管盖，避免试剂外溅。
2、保证质量
样本处理：样本采集后应立即冷藏（2-8℃），长期保存需置于-70℃以下，避免反复冻融。
试剂保存：严格按照说明书要求的温度（通常是-20℃或2-8℃）保存试剂，避免反复冻融。
对照设置：每次实验必须设置阳性对照、阴性对照和空白对照，监控实验有效性。
3、注意安全
生物安全：阳性样本需按生物安全三级标准处理，实验人员需佩戴个人防护装备（PPE）。
废弃物处理：所有废弃物（包括耗材、样本）需经121℃高压灭菌30分钟后方可丢弃
关键字： A 组轮状病毒及基因分型;检测试剂盒;
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