产品介绍：
轮状病毒 C 组（Rotavirus C, RVC）核酸检测试剂盒是一种用于体外定性检测临床样本（如粪便、肛拭子）中轮状病毒 C 组核酸的分子诊断工具。该试剂盒主要基于实时荧光定量 PCR（qPCR）技术，适用于人和动物（如猪、牛）腹泻的病因诊断及流行病学调查。
产品名称 | 轮状病毒 C 组核酸检测试剂盒 | 货号 | AP3132 |
产品分类 | 荧光PCR | 规格 | 50T |
检测原理
该试剂盒采用一步法荧光定量 RT-PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）技术：
逆转录（RT）： 由于轮状病毒是双链 RNA 病毒，试剂盒首先利用逆转录酶将样本中的病毒 RNA 转化为互补 DNA（cDNA）。
荧光 PCR 扩增： 针对 RVC 基因组的保守区域（通常是内壳蛋白基因 VP6 或非结构蛋白基因 NSP3）设计特异性引物和 TaqMan 探针。
信号检测： 在扩增过程中，随着目标片段的指数级扩增，探针被水解，释放出荧光信号（通常为 FAM 荧光素）。仪器实时监测荧光信号的累积，从而判断样本中是否存在 RVC 核酸。
�� 典型性能参数
参数指标 典型数值/范围 说明
检测目标 RVC RNA 靶向 VP6 或 NSP3 基因
检测方法 荧光 RT-PCR 法（探针法） 一步法，闭管操作
检测限 1×10³ Copies/mL 灵敏度高，可检出低载量感染
检测时间 约 2 小时 包含前处理和扩增程序
储存条件 -20℃ ±5℃ 避光保存 有效期通常为 12 个月
适用仪器 ABI 7500, LightCycler 系列等 支持 FAM 通道的荧光 PCR 仪
�� 样本类型
粪便样本（主要）： 急性期（发病 3-5 天内）的新鲜粪便或粪便悬液。
肛拭子： 用于婴幼儿或动物的无创采样。
细胞培养上清： 用于病毒分离后的鉴定。
�� 操作流程简述
样本前处理： 取粪便样本加入 PBS 缓冲液或病毒保存液中，充分混匀后离心，取上清液。
核酸提取： 使用配套的病毒 RNA 提取试剂盒提取总 RNA（部分高灵敏度试剂盒支持直接裂解上样）。
配置反应体系： 将提取的 RNA、PCR 反应液（含酶、引物、探针）按比例混合。
上机检测： 放入荧光定量 PCR 仪，设置好程序（通常包括逆转录、预变性、扩增循环）。
结果分析： 根据扩增曲线的 Ct 值（通常阈值设为 35-40）判读阴阳性。
⚠️ 注意事项
临床意义： 轮状病毒 C 组主要引起儿童和猪的腹泻，通常呈散发分布，症状与 A 组轮状病毒相似（呕吐、腹泻、发热）。该试剂盒主要用于鉴别诊断，排除 A 组轮状病毒后的原因查找，以及猪场腹泻的病原监测。
生物安全： 粪便样本成分复杂，操作应在生物安全二级（BSL-2）实验室进行。
防污染： 必须严格分区操作（试剂准备区、样本处理区、PCR 扩增区），防止气溶胶污染。
结果解读： 阳性结果提示存在 RVC 感染，但需结合临床症状判断是否为致病菌株（排除无症状携带）。由于 RVC 在腹泻病原谱中占比相对较低，检测前建议先进行常规的 A 组轮状病毒和诺如病毒筛查。
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操作步骤：
整个流程遵循“样本处理 → 试剂配制 → 加样 → 上机检测 → 结果分析”的逻辑，核心是防污染和精准操作。
1. 样本处理 (核酸提取)
样本：鼻咽拭子、咽拭子或痰液样本。
裂解：将拭子浸入裂解液，充分混匀后室温静置10分钟。
提取：采用磁珠法或离心柱法提取总RNA，严格按照试剂盒说明书操作。
保存：洗脱后的RNA应立即使用或分装保存于-80℃。
2. 试剂配制与加样
反应体系准备：在试剂准备区配制Master Mix。根据待检测样本数计算总体积，通常按样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照的原则来配制。
推荐体系：例如，使用20μL体系的试剂盒，可包含qPCR预混液16μL、引物探针混合液4μL（具体体积请以实际说明书为准）。
分装：将配好的反应体系分装至PCR反应管中（如20μL/管）。
加样：在样本处理区，分别向反应管中加入5μL的模板RNA（样本、阳性质控、阴性质控）。盖紧管盖，短暂离心，避免污染和气泡。
3. 上机检测
运行程序：将反应管放入荧光定量PCR仪，运行预设程序。典型程序包括：
逆转录：50℃，15分钟（将RNA逆转录为cDNA）。
预变性：95℃，10分钟（激活Hot-Start Taq酶）。
扩增循环：通常为40个循环，每个循环包括变性（95℃，15秒） 和 退火/延伸（60℃，45秒），仪器在退火/延伸步骤同时采集荧光信号。
信号监测：仪器实时监测荧光信号变化，生成扩增曲线。
4. 结果分析与判定
Ct值：仪器根据荧光曲线自动计算阈值循环数（Ct值）。
结果判定：
阳性：样本Ct值 ≤ 37（具体阈值请以试剂盒说明书为准），且扩增曲线呈典型"S"型。
阴性：样本无Ct值或Ct值 > 40。
无效：阳性对照无Ct值或Ct值 > 35，或阴性对照有Ct值，需重新检测。
关键字： 轮状病毒; C 组;检测试剂盒;
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