产品介绍：
卵形疟原虫在形态学上与间日疟原虫相似，且目前已知存在两个主要亚型：P. ovale curtisi 和 P. ovale wallikeri。使用普通镜检方法难以鉴别，且部分快速检测试剂盒敏感性不稳定，因此基于PCR的核酸检测成为确诊和分型的“金标准”。
产品名称 | 卵形疟原虫(Curtisi) 核酸检测试剂盒 | 货号 | AP3256 |
产品分类 | 荧光PCR | 规格 | 50T |
�� 检测原理
该试剂盒主要基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术。
核心机制： 针对卵形疟原虫 curtisi 亚型特有的基因序列（通常位于18S rRNA基因或tryptophan-rich antigen基因的保守区）设计特异性引物和探针。
特异性区分： 通过精心设计的引物探针组合，该试剂盒能够特异性扩增 curtisi 亚型，而不与 wallikeri 亚型、恶性疟原虫、间日疟原虫等其他疟原虫发生交叉反应。
荧光检测： 采用 TaqMan 探针法（通常标记为FAM荧光素）。若样本中含有 P. ovale curtisi 的DNA，PCR扩增过程中会释放荧光信号，仪器根据Ct值判断样本是否为阳性。
�� 主要特点与性能
特性 描述
高特异性 专门识别 P. ovale curtisi 亚型，有效区分 P. ovale wallikeri 亚型及其他四种人类疟原虫。
高灵敏度 最低检测限通常可达 1×10³ Copies/mL（或 100-500 拷贝/毫升），显著高于传统显微镜镜检法。
快速高效 全程检测时间约 2-3 小时（含核酸提取），自动化程度高。
临床价值 解决了镜检难以区分卵形疟与间日疟的难题，且能进行亚型鉴定，指导精准诊疗。
�� 临床意义与应用
精准分型诊断： 卵形疟原虫的两个亚型（curtisi 和 wallikeri）在临床表现、复发率及实验室检查指标上可能存在差异。该试剂盒能精准锁定 curtisi 亚型，避免误诊漏诊。
低密度感染检测： 对于镜检阴性但临床高度疑似（如不明原因发热、有疫区旅居史）的患者，PCR检测能发现低密度的隐性感染。
流行病学调查： 用于监测不同地区 P. ovale curtisi 的流行比例，为疟疾防控策略提供数据支持。
适用样本类型
抗凝全血： 首选样本。通常使用EDTA或枸橼酸钠抗凝的静脉血。
滤纸干血斑（DBS）： 适用于偏远地区或大规模现场筛查，样本易于运输和保存。
⚠️ 注意事项
操作环境： 必须严格分区操作（试剂准备区、样本制备区、扩增区），防止扩增产物污染导致假阳性。
核酸提取： DNA提取的质量是检测灵敏度的关键因素，建议使用高效的商业化核酸提取试剂盒。
结果解读： Ct值 ≤ 35-40（视具体试剂盒说明书而定）且扩增曲线呈典型“S”型判为阳性。阴性结果不能完全排除感染，需结合抗原检测或血清学检测综合判断。
混合感染： 需注意是否存在与其他疟原虫的混合感染，必要时使用通用型疟原虫试剂盒进行复核。
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操作步骤：
整个流程遵循“样本处理 → 试剂配制 → 加样 → 上机检测 → 结果分析”的逻辑，核心是防污染和精准操作。
1. 样本处理 (核酸提取)
样本：鼻咽拭子、咽拭子或痰液样本。
裂解：将拭子浸入裂解液，充分混匀后室温静置10分钟。
提取：采用磁珠法或离心柱法提取总RNA，严格按照试剂盒说明书操作。
保存：洗脱后的RNA应立即使用或分装保存于-80℃。
2. 试剂配制与加样
反应体系准备：在试剂准备区配制Master Mix。根据待检测样本数计算总体积，通常按样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照的原则来配制。
推荐体系：例如，使用20μL体系的试剂盒，可包含qPCR预混液16μL、引物探针混合液4μL（具体体积请以实际说明书为准）。
分装：将配好的反应体系分装至PCR反应管中（如20μL/管）。
加样：在样本处理区，分别向反应管中加入5μL的模板RNA（样本、阳性质控、阴性质控）。盖紧管盖，短暂离心，避免污染和气泡。
3. 上机检测
运行程序：将反应管放入荧光定量PCR仪，运行预设程序。典型程序包括：
逆转录：50℃，15分钟（将RNA逆转录为cDNA）。
预变性：95℃，10分钟（激活Hot-Start Taq酶）。
扩增循环：通常为40个循环，每个循环包括变性（95℃，15秒） 和 退火/延伸（60℃，45秒），仪器在退火/延伸步骤同时采集荧光信号。
信号监测：仪器实时监测荧光信号变化，生成扩增曲线。
4. 结果分析与判定
Ct值：仪器根据荧光曲线自动计算阈值循环数（Ct值）。
结果判定：
阳性：样本Ct值 ≤ 37（具体阈值请以试剂盒说明书为准），且扩增曲线呈典型"S"型。
阴性：样本无Ct值或Ct值 > 40。
无效：阳性对照无Ct值或Ct值 > 35，或阴性对照有Ct值，需重新检测。
关键字： 卵形疟原虫 ;Curtisi;检测试剂盒;
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