牛肾盂肾炎棒杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

牛肾盂肾炎棒杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品用途

科研检测，适用于牛肾盂肾炎棒杆菌（Corynebacterium renale）DNA的定性与定量分析。

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期12个月。

适用仪器：

ABI系列、Bio-Rad系列、Roche LightCycler 480、Agilent Stratagene MX系列、博日系列等主流荧光定量PCR仪。

产品特点

高灵敏度与特异性：引物及探针针对Corynebacterium renale保守序列设计，避免与其他微生物交叉反应。

即开即用：含预混PCR Master Mix、引物探针混合物、阳性对照（无传染性DNA片段），用户仅需提供DNA模板。

宽线性范围：标准曲线覆盖10²~10⁷拷贝/μL，适用于定量分析。

内控设计：提供阳性对照（非活体DNA）及阴性对照（水），便于结果判读。

试剂盒组成

| 组分 | 规格（50T） | 保存条件 |

| qPCR预混液（含染料） | 1 mL | -20℃ |

| 引物探针混合液 | 100 μL | -20℃ |

| 阳性对照（10⁸拷贝/μL） | 50 μL | -20℃ |

| 荧光PCR专用稀释液 | 1 mL | 4℃ |

| 使用说明书 | 1份 | - |

实验操作步骤

标准曲线制备（10倍梯度稀释）

标记离心管：编号7~2，分别加入45 μL稀释液。

稀释阳性对照：

7号管：加入5 μL原液（10⁸拷贝/μL），震荡混匀，得10⁷拷贝/μL标准品。

依次梯度稀释至2号管（10²拷贝/μL）。

注意事项：稀释需在独立区域操作，避免气溶胶污染。

PCR反应体系配制（20μL/反应）

| 组分 | 体积（μL） |

| qPCR预混液 | 10 |

| 引物探针混合液 | 2 |

| DNA模板/标准品/对照 | 2 |

| 无核酸酶水 | 6 |

PCR扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 |

| 扩增 | 95℃ | 15 sec | 35 |

| | 57℃ | 15 sec | |

| | 72℃ | 40 sec | |

| 最终延伸 | 72℃ | 10 min | 1 |

结果判读

定量分析：根据标准曲线计算样品中Corynebacterium renale DNA拷贝数。

质控要求：

阳性对照：Ct值≤30，扩增曲线呈典型S型。

阴性对照：无扩增信号（Ct值≥40或无曲线）。

无效实验处理：若对照异常，需排查污染或重复实验。

注意事项

避免污染：操作分区（试剂准备、样品处理、扩增区），使用带滤芯枪头。

反复冻融：试剂解冻后建议分装，避免性能下降。

适用性：仅限科研，不适用于临床诊断。

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