罗氏沼虾诺达病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

产品用途

本试剂盒用于罗氏沼虾诺达病毒RNA的定性及定量检测。该病毒是“白尾病”的主要病原体，可导致虾苗死亡率达80%-100%，我国将其列为二类动物疫病。

适用范围：科研用途（不可用于临床诊断）。

检验原理

技术原理：基于实时荧光定量RT-PCR技术，针对MrNV基因保守区域设计特异性引物，通过荧光染料（如SYBR Green）与双链DNA结合产生信号，实现RNA的扩增与定量检测。

定量方法：采用外标准曲线法，无需内标，通过系列稀释阳性对照建立标准曲线，计算待测样本中病毒RNA拷贝数。

核心优势

高灵敏度：最低检出限为1×10³ copies/mL，显著优于传统培养法。

强特异性：引物设计经生物信息学验证，避免与其他病原体交叉反应。

快速高效：全程检测时间约1-2小时（含RNA提取），兼容自动化核酸提取设备。

试剂组成

| 名称 | 规格 |

| 5×双酶一管式RT-PCR Buffer | 200 μL×1管 |

| MMLV-Taq Mix | 75 μL×1管 |

| 超纯水 | 1 mL×1管 |

| MrNV特异性引物混合液 | 100 μL×1管 |

| 阳性对照（1×10⁸ copies/μL） | 50 μL×1管 |

| 核酸释放剂 | 1 mL×1管（20次用量） |

| 使用手册 | 1份 |

注：阳性对照为人工合成的DNA片段，不含活病毒。

操作流程

标准曲线制备

标记6支离心管（7-2号），每管加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液。

在7号管中加入5 μL阳性对照（1×10⁸ copies/μL），震荡混匀后得1×10⁷ copies/μL标准品。

依次梯度稀释至2号管，获得6个浓度标准品（1×10⁷~1×10² copies/μL），冰上保存备用。

样本RNA提取

样本类型：虾组织（亲虾、虾苗）、饵料、水产品等。

提取方法：推荐使用商业化病毒RNA提取试剂盒（如QIAGEN、Roche），操作需在生物安全柜内完成。

荧光定量PCR反应

反应体系（以25 μL为例）：

5×RT-PCR Buffer 5 μL

MMLV-Taq Mix 1 μL

引物混合液 1 μL

模板RNA 5 μL

超纯水补至25 μL。

扩增程序：

逆转录：50℃ 15分钟

预变性：95℃ 3分钟

扩增：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循环），于60℃采集荧光信号。

结果分析

根据标准曲线计算样本中MrNV RNA拷贝数，Ct值≤35且扩增曲线呈S型判为阳性。

注意事项

分区操作：严格区分试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区，避免污染。

质量控制：每批实验需包含阴性对照（超纯水）和阳性对照。

保存条件：试剂盒-20℃避光保存，避免反复冻融。

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