加利福利亚脑炎病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 加利福利亚脑炎病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | California Encephalitis Virus Dye-based qRT-PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4513 |
产品基本信息
规格：50次/盒（20μL反应体系）
保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月，避免反复冻融（≤7次）。
适用仪器：ABI、MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等荧光定量PCR仪。
产品特点
高灵敏度与特异性：引物及探针针对病毒高度保守区设计，无交叉反应。
即开即用：用户仅需提供样品RNA模板，无需额外优化。
内控设计：含阳性质控品（非活病毒，为DNA片段）和阴性质控品，便于结果判读。
快速检测：适用于科研用途，不适用于临床诊断。
组分清单
反应液（100μL×1管）
阳性质控品（900μL×1管，10E8拷贝/μL）
阴性质控品（50μL×1管）
说明书（1份）
自备材料
无RNA/DNA酶的1.5mL离心管、0.2mL PCR反应管、滤芯吸头（10/200/1000μL）。
离心机、振荡混合器、移液器及配套耗材。
样本要求
样本类型：全血、血清、血浆、口腔拭子、病灶渗出物等（需避免交叉污染）。
采集与保存：
血液样本：EDTA抗凝管采集，立即混匀；
组织/分泌物：灭菌容器保存；
短期保存：-20℃；长期保存：-70℃以下。
操作步骤
1. 样本处理
按规范提取RNA，避免降解。
2. 阳性对照稀释（示例：10E2-10E7梯度）
在独立区域用专用稀释液进行10倍梯度稀释，冰上暂存。
3. PCR反应体系配制
反应液避光融化后混匀，短暂离心，按20μL/管分装至PCR管。
分别加入模板RNA（样本/对照），盖紧管盖避免气泡。
4. 上机检测
按仪器说明书设置程序：
逆转录：50℃ 15分钟；
预变性：95℃ 5分钟；
扩增：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（40循环）。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行。
防污染措施：使用一次性耗材，实验后以10%次氯酸或75%乙醇消毒台面及移液器。
质量控制：每批次实验需包含阴/阳性质控，结果无效需复检。
结果判读
阳性：Ct值≤35，且扩增曲线呈典型S型；
可疑：Ct值35-40，建议重复检测；
阴性：无Ct值或≥40。
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