检验原理
本试剂盒基于SYBR Green染料法实时荧光定量PCR技术，针对杜氏利什曼虫基因保守区域设计特异性引物，通过荧光信号实时监测核酸扩增过程，实现病原体核酸的定性和定量检测。
产品名称 | 杜氏利什曼虫(黑热病病原虫)染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Leishmania donovani Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4409 |
试剂组成
Ld扩增液：50μL ×1管
Ld反应液（含SYBR Green Mix）：950μL ×1管
阳性质控品（1×10⁸ copies/μL）：50μL ×1管
阴性质控品（无核酸酶水）：50μL ×1管
说明书：1份
储存条件及有效期
-20℃避光保存，避免反复冻融（≤7次），有效期12个月。
适用仪器
兼容ABI系列、Bio-Rad CFX、Roche LightCycler、Eppendorf等主流荧光定量PCR仪。
自备耗材：无核酸酶的PCR管、离心管、滤芯吸头（10/200/1000μL）、移液器及离心机。
样品要求
样本类型：全血、骨髓穿刺液或组织样本，采集需符合《病原微生物样本操作规范》。
保存条件：短期（1周内）可存于-20℃，长期需-70℃保存，避免反复冻融。
运输：冰袋（2~8℃）运输，严禁冻融循环。
使用方法
DNA提取
使用兼容的核酸提取试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL。
标准曲线制备（定量检测需选做）
将阳性质控品按10倍梯度稀释（10⁷~10² copies/μL），用于建立标准曲线。
反应体系配制（试剂准备区）
每20μL体系包含：
Ld反应液 18μL
DNA模板 2μL
（阴性对照以水替代模板，阳性对照使用10⁵ copies/μL标准品）
扩增程序
预变性：95℃ 5分钟
循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循环，采集荧光信号）
熔解曲线分析：60~95℃（0.5℃/秒）
结果判读
定性：Ct值≤35且熔解曲线峰值单一判为阳性。
定量：根据标准曲线计算拷贝数。
注意事项
不同批号组分不可混用，避免污染。
本产品仅限科研使用，临床诊断需经额外验证。
操作需分区（试剂配制、样本处理、扩增区），穿戴防护装备。
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关键字： 杜氏利什曼虫(黑热病病原虫);染料法荧光定量;PCR试剂盒;