预期用途
本试剂盒基于实时荧光定量PCR技术，用于定性检测鲤春病毒血症病毒（SVCV），适用于鱼类样本的病原诊断及流行病学监测。
产品名称 | 鲤春病毒血症病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Spring Viremia of Carp Virus Dye-based qRT-PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4417 |
检验原理
通过设计针对SVCV基因组高度保守区域的特异性引物和探针，在PCR扩增过程中释放荧光信号。利用荧光定量PCR仪实时监测信号强度，实现对靶基因的定性分析。
主要组成成分
SVCV RT-PCR反应液：25T/盒含437.5 μL×1管，50T/盒含875 μL×1管。
SVCV混合酶液：25T/盒含62.5 μL×1管，50T/盒含125 μL×1管。
阳性对照：40 μL×1管（含SVCV靶基因质粒）。
阴性对照：40 μL×1管（灭菌纯水）。
说明书：1份。
储存条件及有效期
避光保存于-20℃以下，避免反复冻融，有效期12个月。
适用仪器
兼容主流荧光定量PCR仪，包括：
ABI系列（如7500、QuantStudio）
Bio-Rad系列（如CFX96）
Roche LightCycler 480
杭州博日系列等。
样本要求
有临床症状的鱼：
体长≤4 cm：取整条鱼。
体长4~6 cm：取内脏（含肾）。
体长>6 cm：取脑、肝、肾、脾。
无症状鱼：取肾、脾、鳃及脑组织；成熟雌鱼需额外采集卵巢液。
检验方法
试剂准备：
试剂解冻后混匀，瞬时离心去除管壁液体。
按反应数（n）计算各组分用量，参考下表配制反应体系（示例为20 μL体系）：
| 组分 | 单次反应体积 |
| RT-PCR反应液 | 17.5 μL |
| 混合酶液 | 2.5 μL |
| 模板DNA/对照 | 5 μL |
PCR程序设置：
逆转录：50℃ 15分钟（可选，若含RT步骤）。
预变性：95℃ 3分钟。
扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）。
结果判读：
阳性：Ct值≤35且扩增曲线呈S型。
阴性：无Ct值或Ct值>35。
注意事项
实验分区操作（试剂准备区、样本制备区、扩增区），避免交叉污染。
阳性对照需单独处理，防止污染其他组分。
失效或反复冻融的试剂可能影响检测灵敏度。
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