眼蜱通用染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 眼蜱通用染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Tick Universal Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4584 |
产品概述
眼蜱是一类重要的吸血节肢动物，可传播多种病原体，对人类健康和畜牧业发展造成严重威胁。本试剂盒以染料法荧光定量PCR技术为核心，基于眼蜱高度保守的特异性基因序列设计引物，可实现对动物体表、环境样本中眼蜱核酸的快速定性与定量检测，适用于蜱媒病流行病学调查、监测及相关科研工作。
产品特点
操作便捷：即开即用，用户仅需提供样本DNA模板，无需额外配制核心试剂
高特异性：引物针对眼蜱保守基因区域设计，与其他蜱类、微生物核酸无交叉反应
高灵敏度：检测下限可达几百拷贝/反应
宽线性范围：定量检测线性范围覆盖5个以上数量级
一管式设计：PCR扩增在同一反应管内完成，无需中间转移样本，大幅降低交叉污染风险
双重功能：可同时满足定性筛查与精确定量检测需求
电泳兼容：PCRmix中含上样染料，PCR后产物可直接上样电泳
包装规格及成分
组分名称 规格 包装标识
2×qPCR MagicMix（含染料） 1mL 棕色管
眼蜱通用PCR引物混合液 100μL 白盖管
荧光PCR专用模板稀释液 1mL 黄盖管
阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） 50μL 红盖管
DNA病毒裂解液（试用装） 9mL（15次用量） 绿盖管
使用手册 1份
储存与运输
储存条件：-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（建议≤7次）。
有效期：12个月。
适用仪器
兼容主流荧光定量PCR仪，包括ABI系列、MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等。
样本要求
样本类型：全血、血清、血浆、眼部拭子或病毒培养物（具体采集方法参考《临床微生物样本采集规范》）。
保存条件：短期保存于-20℃，长期需-70℃以下，避免反复冻融。
实验操作步骤
步骤1：阳性对照梯度稀释（用于定量检测）
由于标准品浓度非常高，稀释操作需在独立区域进行，避免污染样品或其他试剂
标记6个离心管，分别为7、6、5、4、3、2号
每管加入45μL荧光PCR专用模板稀释液
7号管加入5μL1×10⁸拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10⁷拷贝/μL的标准品
换枪头，依次倍比稀释得到1×10⁶、1×10⁵、1×10⁴、1×10³、1×10²拷贝/μL的系列标准品
稀释后的标准品放冰上待用，全程使用带滤芯枪头，避免交叉污染
步骤2：样本DNA提取
可使用试剂盒配套的DNA裂解液或商业化核酸提取试剂盒，以下为配套裂解液操作方法：
眼蜱标本：取蜱虫标本置于离心管中，加入50μL DNA裂解液，充分研磨后100℃加热10min，13000rpm离心3min，取5μL上清作为模板
环境样本：取土壤、植物表面擦拭样本，加入0.5mL生理盐水振荡混匀，13000rpm离心3min，弃上清后加入50μL DNA裂解液，后续操作同眼蜱标本
阳性制备对照：取10μL阳性对照稀释10000倍（浓度为1×10⁴拷贝/μL），加水至与样品等体积
阴性制备对照：用无菌超纯水替代样本
步骤3：荧光定量PCR反应体系配制（20μL体系）
组分 样品管/阴性对照管 阳性对照管
2×qPCR MagicMix 10μL 10μL
眼蜱通用PCR引物混合液 2μL 2μL
样本DNA/超纯水 8μL -
系列标准品 - 8μL
注意：
仅ABI7500、7700和7900仪器需要使用ROX作为对照，其他荧光PCR仪器无需使用ROX，用水替代
样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，阳性对照需最后添加，避免污染
步骤4：PCR反应程序设置
阶段 温度 时间 循环数
预变性 95℃ 5min 1
扩增循环 95℃ 10sec 40
60℃ 30sec（采集FAM通道荧光）
注意事项
本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断
实验全程佩戴手套口罩，使用无菌耗材，避免交叉污染
反应体系配制需在冰上操作，避免试剂反复冻融
PCR仪可能需要优化反应程序，建议进行温度梯度预实验
样本采集后应尽快处理，-20℃保存不超过1个月，避免反复冻融
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