百日咳波氏杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称
英文名称
Bordetella pertussis Dye-based qPCR Kit
规格
50T
货号
PR4585
检验原理
染料法检测：采用SYBR Green等荧光染料，通过掺入双链DNA发出荧光信号，实时监测扩增产物。
高特异性引物：针对Bordetella pertussis保守序列设计，引物长度25-30 bp，确保扩增特异性。
灵敏度与线性范围：检测下限达100拷贝/反应，定量线性范围覆盖5个数量级。
操作步骤
样本处理：提取待测样本DNA，建议使用高纯度模板（浓度≥50 ng/μL）。
反应体系配制（20μL）：
10× PCR Buffer
dNTPs
特异性引物对
荧光染料
DNA聚合酶
模板DNA（推荐4~5倍常规PCR用量）
扩增程序：
预变性：95℃ 5 min
循环阶段（40 cycles）：95℃ 15 sec → 60℃ 30 sec（采集荧光信号）
数据分析：
荧光阈值设定为基线信号（前15循环）标准偏差的10倍。
通过Ct值定量或定性分析。
注意事项
试剂处理：
所有组分完全融化后轻柔混匀（避免剧烈振荡），使用前置于冰上。
避免反复冻融，分装保存。
污染控制：
分区操作（样本处理、PCR配制、扩增区分离）。
使用无核酸酶耗材。
质控要求：
每批次实验需包含阴性对照（无模板）和阳性对照（试剂盒提供）。
性能参数
特异性：不与副百日咳波氏杆菌（B. parapertussis）等近源种交叉反应。
重复性：批内/批间变异系数（CV）≤5%。
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