产品名称 | 禽副粘病毒通用染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Avian Paramyxovirus (APMV) Universal Dye-based Fluorescent Quantitative RT-PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4474 |
试剂组成
扩增液：100μL×1管
反应液：900μL×1管
阳性质控品：50μL×1管（含已知浓度DNA片段，避免活病毒污染风险）
阴性质控品：50μL×1管
说明书：1份
注意事项：
不同批号试剂不可混用，组分数量与包装标示检测次数一致。
需自备无DNA/RNA酶的耗材（如离心管、滤芯吸头）及仪器（离心机、移液器等）。
储存与运输
条件：-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（限7次内）。
有效期：12个月。
适用仪器
支持ABI、MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等主流荧光定量PCR仪。
样本要求
类型：全血、血清、血浆、口腔/咽喉拭子、病毒培养物等（需符合《临床微生物样本采集规范》）。
保存：短期-20℃；长期-70℃以下，避免交叉污染。
操作步骤
标准品稀释（以6个10倍梯度为例）：
标记离心管（7-2号），每管加45μL稀释液。
7号管加入5μL阳性对照（1×10^8拷贝/μL），震荡后得1×10^7拷贝/μL，依次稀释至1×10^2拷贝/μL。
操作需在独立区域进行，防止污染。
反应体系配制（20μL体系）：
| 组分 | 体积 |
| 扩增液 | 2μL |
| 反应液 | 10μL |
| 模板RNA/DNA | 5μL |
| 超纯水 | 补至20μL |
PCR程序：
逆转录：50℃ 30分钟
预变性：94℃ 10分钟
扩增（40循环）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM通道信号）
结果判读
定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，推算样本浓度。
定性检测：
阴性：Ct≥40；阳性：Ct≤35。
35<Ct<40需复测，复测Ct<35判为阳性。
注意事项
实验需设置阴阳性对照，确保扩增曲线正常（阳性Ct≤30，阴性Ct≥40）。
避免试剂反复冻融，分装保存以维持稳定性。
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