超氧阴离子(Oxygen free radical, OFR)试剂盒说明书
微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用,但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用,导致机体细胞和组织代谢异常,从而引起多种疾病。
测定原理:
超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO2-,NO2-在对氨基苯磺酸和α-萘胺的作用下,生成红色的偶氮化合物,在530nm处有特征吸收峰,根据ΔA值可以计算样品中O2-含量,反应式为NH2OH + 2O2- +H+ → NO2- + H2O2 + H2O。
自备仪器和用品:
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、氯仿和蒸馏水。
超氧阴离子提取:
1、植物、动物组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液)进行冰浴匀浆,然后,10000g,4℃,离心20min,取上清置于冰上待测。
2、细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心20min,取上清置于冰上待测。
3、血清或培养液:直接测定。
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