大鼠皮质酮/肾上腺酮(CORT)ELISA试剂盒

本试剂盒采用竞争性酶联免疫吸附试验原理开展检测，酶标板微孔内预包被大鼠皮质酮（CORT）特异性抗原。检测体系中，样本、标准品中的大鼠CORT抗原与固相包被抗原共同竞争结合限量的CORT酶标特异性抗体，经过恒温孵育与洗板操作，剔除所有未发生特异性结合的游离成分。后续加入显色底物进行酶促显色反应，显色强度与样本中CORT浓度呈反比关系，最终通过终止液终止反应，读取吸光度数值并拟合标准曲线，即可精准定量大鼠样本中皮质酮的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测灵敏度0.1ng/mL，能够检出大鼠体内微量皮质酮基础表达水平。

检测范围：0.3ng/mL - 25ng/mL，覆盖大鼠正常生理、应激损伤、内分泌失调模型的浓度区间。

反应时间：总反应时长100分钟，恒温37℃分段孵育，操作流程简洁高效。

保存条件：试剂盒2 - 8℃冷藏保存，浓缩洗涤液低温易结晶，使用前可温水浴溶解，不影响试剂活性。

有效期：常规保存有效期12个月，开封后试剂建议1个月内用完。

特异性：特异性靶向大鼠皮质酮，与皮质醇、孕激素等甾体激素无明显交叉反应，检测结果精准。

重复性：板内变异系数≤5.5%，板间变异系数≤7.5%，重复性符合科研实验标准。

注意事项：样本需新鲜制备，避免反复冻融；孵育过程严禁孔板干燥，否则会导致非特异性显色；终止液加入顺序与速度需均匀一致。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

1. 试剂室温放置 30min 回温，配制洗涤工作液；待测血浆样本冰上解冻，12000r/min 离心 5min 取上清备用。

2. 固定酶标板排布，标准品孔加入梯度 CORT 标准品 50μL，检测孔加入待测上清 50μL，空白孔无添加。

3. 所有检测孔一次性加入酶标记抗体工作液 100μL，封板密封，杜绝交叉污染。

4. 37℃避光孵育 50min，保证抗原抗体充分特异性结合。

5. 弃净孔中液体，洗涤液灌满微孔浸泡 35s，洗板 6 次，最后充分拍干微孔水分。

6. 每孔分别添加显色 A 液、B 液各 50μL，轻微振荡混匀，37℃避光显色 18min。

7. 滴加终止液 50μL 终止底物反应，450nm 波长检测吸光度，依据标准曲线计算样本皮质酮浓度。