大鼠肾上腺髓质素(ADM)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，将纯化的大鼠ADM特异性抗体包被于酶标板作为固相捕获载体。加入待测样本和标准品后，其中的ADM抗原与固相抗体特异性结合，洗孔去除未结合成分，再加入酶标记ADM检测抗体，形成完整的免疫复合物。通过TMB底物显色、酸性终止液终止反应，检测吸光度值，依据标准曲线可精准定量大鼠样本中肾上腺髓质素ADM的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度0.2pg/mL，超高灵敏度检测微量ADM多肽。

检测范围：0.6pg/mL - 120pg/mL，适用于大鼠血清、肾上腺组织、血浆样本。

反应时间：总时长100分钟，样本温育40分钟、二抗温育35分钟、显色25分钟。

保存条件：2-8℃避光保存，浓缩试剂低温密封，禁止反复冻融。

有效期：未开封有效期12个月，开封后1个月内用完。

特异性：特异性结合大鼠ADM，与肾上腺其他活性多肽无交叉反应。

重复性：板内CV≤7.2%，板间CV≤9.2%，内分泌多肽检测数据稳定。

注意事项：血浆样本需添加抗凝剂，避免凝血因子干扰；样本需低温保存。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒常温放置 28min，按说明稀释洗涤液，梯度稀释 ADM 标准品，标记酶标板孔位类型，大鼠血清样本低温解冻后稀释备用。

标准孔加入 ADM 梯度标准液 50μL，样本孔加入稀释血清样本 50μL，空白孔添加样本稀释液 50μL，全孔加入酶结合物工作液 100μL，密封封板。

37℃避光孵育 56min，特异性免疫结合完全反应。

去除封板弃净液体，洗涤液注满每孔浸泡 39s，甩干洗板 5 次，清除非特异性吸附物质。

每孔依次添加显色 A 液、B 液各 50μL，震荡混匀，37℃避光显色 15min。

加入终止液 50μL 终止显色，轻摇酶标板混匀体系。

15min 内 450nm 测吸光度，换算样本 ADM 浓度。