产品名称:拟无枝菌酸菌通用PCR检测试剂盒
英文名称:Amycolaptosis spp.PCR
货号:YS-P013810
分类:PCR检测试剂盒
规格:50T/盒
检测原理:
靶向该菌属 16S rRNA 保守区域通用引物,普通 PCR 扩增土壤微生物核酸,凝胶条带确认样本含拟无枝菌酸菌。
SYBR Green qPCR 定量体系,扩增属特异性基因,熔解曲线区分该菌属与分枝杆菌等近缘放线菌。
微生物提取质控双重 PCR,同时扩增细菌通用内参与拟无枝菌酸菌靶基因,消除提取抑制剂干扰。
实验流程:
样本制备:
使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。
建议DNA浓度≥20 ng/μL,A260/A280比值1.8~2.0。
反应体系配制(20 μL体系示例):
预混PCR Master Mix(含染料、dNTPs、Taq酶等)
特异性引物混合液
模板DNA(2~5 μL)
补充无核酸酶水至终体积。
PCR扩增程序:
预变性:95℃ 5分钟;
循环阶段(40~45 cycles):95℃ 10秒 → 60℃ 30秒(采集荧光信号);
熔解曲线分析:60~95℃(可选,用于验证扩增特异性)。
结果判读:
阳性:Ct值≤35且熔解曲线峰单一;
阴性:Ct值≥40或无扩增曲线;
可疑:35<Ct值<40,建议复测或结合熔解曲线分析。
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注意事项:
所有耗材必须无核酸酶,吸头一次性使用,禁止重复吸取;
阳性模板拷贝浓度高,开盖操作轻柔,避免气溶胶扩散造成全域污染;
试剂融化后冰上放置不超过 2 h,用完立即放回 - 20℃;
废弃 PCR 管、扩增产物、实验废液统一 121℃高压灭菌后丢弃;
试剂盒仅用于动植物、水产、微生物疫病科研检测,禁止人体临床检测;
移液器、操作台定期紫外消毒,长期污染需更换全新试剂盒全套试剂。
关键字: 拟无枝菌酸菌通用;PCR检测试剂盒;
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