本试剂盒为伯克氏菌属通用型检测试剂，靶向伯克氏菌属细菌高度保守基因，可广谱检测该属各类致病菌种的核酸，适配土壤、水体、动植物组织、养殖环境等多种样本。试剂盒通用性广、灵敏度高，可快速完成伯克氏菌属病原的初步筛查与鉴别。适用于农业、畜牧、环境领域的病原监测、病害溯源、菌群分布调研及批量样本快速检测。
产品名称 | 伯克氏菌通用PCR检测试剂盒 | 货号 | YS-P013969 |
英文名称 | Burkholderia spp.PCR | 规格 | 50T |
有效期 | 12个月 | 保存 | -20℃保存 |
基础原理：
伯克氏菌属保守 16S rRNA 基因通用引物 qPCR，广谱检出全部伯克氏菌属菌种。
通用普通 PCR 扩增细菌同源外膜蛋白基因，任意伯克氏菌均可扩增目标条带。
通用染料荧光 PCR，先筛查伯克氏菌属阳性，再用种特异性引物细分菌种。
操作步骤：
DNA提取（样本制备区）
使用自选方法或兼容的核酸提取试剂盒纯化样本DNA，确保无抑制剂残留。
标准曲线制备（样本制备区）
标记6支离心管为7至2号，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用带滤芯枪头）。
梯度稀释阳性对照：
7号管：加入5 μL 1×10^8拷贝/μL阳性对照，震荡混匀，得1×10^7拷贝/μL标准品；
依次稀释至2号管，最终浓度跨5个数量级（1×10^7至1×10^3拷贝/μL）。
所有标准品置于冰上备用，避免反复冻融。
试剂配制（试剂准备区）
反应液避光解冻后涡旋混匀，短暂离心分装至PCR管。
每反应体系20 μL，含预混引物、荧光染料及缓冲液。
加样（样本处理区）
分别加入5 μL待测DNA或标准品至反应管，阴性对照以DEPC-H2O替代。
盖紧管盖，避免气泡干扰。
PCR扩增（核酸扩增区）
按以下程序运行定量PCR仪：
预变性：95℃ 2分钟；
循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；
熔解曲线分析（可选）。
注意事项：
试剂盒含生物源性质粒模板，操作全程佩戴手套、口罩，阳性模板仅在生物安全柜开盖；
所有一次性耗材、PCR 废液、电泳凝胶实验后 121℃高压灭菌再丢弃；
试剂避免反复冻融，单次融化冰上放置不超过 2 h，使用完毕立即放回 - 20℃；
移液器吸头一次性使用，禁止重复吸取，防止交叉污染；
试剂盒仅用于科研检测，严禁人临床体外诊断；
扩增产物区产物不可带回试剂、提取区，防止气溶胶大面积污染实验室；
若阴性对照持续出现杂带，全部更换全新试剂盒，实验室台面、移液器紫外过夜消毒。
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