产品名称:马鼻肺炎病毒PCR检测试剂盒
英文名称:Equine Rhinopneumonitis Virus(ERV)PCR
货号:YS-P014170
分类:PCR检测试剂盒
规格:50T/盒
检测原理:
靶向马鼻肺炎病毒 DNA 聚合酶基因,区别马交媾疹等其他马疱疹病毒
鼻分泌物样本核酸纯化,降低呼吸道黏液对 Taq 酶活性的抑制
实时扩增曲线阳性样本呈现典型 S 型荧光增长,阴性无荧光信号
实验流程:
DNA提取(样本制备区)
使用自选方法或兼容的核酸提取试剂盒纯化样本DNA,确保无抑制剂残留。
标准曲线制备(样本制备区)
标记6支离心管为7至2号,每管加入45 μL DEPC-H2O(需使用带滤芯枪头)。
梯度稀释阳性对照:
7号管:加入5 μL 1×10^8拷贝/μL阳性对照,震荡混匀,得1×10^7拷贝/μL标准品;
依次稀释至2号管,最终浓度跨5个数量级(1×10^7至1×10^3拷贝/μL)。
所有标准品置于冰上备用,避免反复冻融。
试剂配制(试剂准备区)
反应液避光解冻后涡旋混匀,短暂离心分装至PCR管。
每反应体系20 μL,含预混引物、荧光染料及缓冲液。
加样(样本处理区)
分别加入5 μL待测DNA或标准品至反应管,阴性对照以DEPC-H2O替代。
盖紧管盖,避免气泡干扰。
PCR扩增(核酸扩增区)
按以下程序运行定量PCR仪:
预变性:95℃ 2分钟;
循环阶段(40次):95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(采集荧光信号);
熔解曲线分析(可选)。
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注意事项:
试剂盒含生物源性质粒模板,操作全程佩戴手套、口罩,阳性模板仅在生物安全柜开盖;
所有一次性耗材、PCR 废液、电泳凝胶实验后 121℃高压灭菌再丢弃;
试剂避免反复冻融,单次融化冰上放置不超过 2 h,使用完毕立即放回 - 20℃;
移液器吸头一次性使用,禁止重复吸取,防止交叉污染;
试剂盒仅用于科研检测,严禁人临床体外诊断;
扩增产物区产物不可带回试剂、提取区,防止气溶胶大面积污染实验室;
若阴性对照持续出现杂带,全部更换全新试剂盒,实验室台面、移液器紫外过夜消毒。
关键字: 马鼻肺炎病毒;PCR检测试剂盒;
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