产品名称：马动脉炎病毒PCR检测试剂盒
英文名称：Equine Arteritis Virus(EAV)RTPCR
货号：YS-P014161
分类：PCR检测试剂盒
规格：50T/盒
检测原理：
采用实时荧光定量 RT-PCR 技术，试剂盒内置病毒特异性上下游引物与 TaqMan 荧光探针，提取样本中马动脉炎病毒 RNA 后，经逆转录生成 cDNA，扩增过程探针结合靶基因序列，酶切后释放荧光信号，依靠荧光增量定性判断病毒存在。
普通一步法 RT-PCR 琼脂糖凝胶电泳检测，针对马动脉炎病毒保守基因设计特异性引物，样本病毒 RNA 同步完成逆转录与 PCR 扩增，扩增产物电泳后观察目标条带，有条带即为阳性样本。
巢式 RT-PCR 检测原理，设置内外两层特异性引物，第一轮扩增病毒长片段靶序列，第二轮្្
实验流程：
1. DNA提取（样本制备区）
使用自选方法或兼容试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。
2. 标准曲线制备（独立操作区）
标记6管为梯度稀释点（如7-2），每管加45 μL DEPC水。
取5 μL阳性对照依次稀释，混匀后作为标准品（避免污染）。
3. PCR反应体系配制（试剂配制区）
按以下比例配制（示例）：
| 组分 | 体积（μL） |
| 2× Master Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| DEPC水 | 6 |
4. 上机检测
程序设置：预变性95℃ 3 min；40循环（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲线分析。
数据分析：根据Ct值及标准曲线计算样本浓度。
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注意事项：
1、实验分区管理
实验全程需严格划分三个独立区域：试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区，各区实验服、移液器及耗材严禁混用，防止交叉污染。
2、防止污染操作
使用带滤芯枪头，每步更换枪头；
阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行，避免污染其他试剂；
加样后立即盖紧管盖，避免气溶胶扩散。
3、试剂保存与使用
所有试剂需-20℃避光保存，避免反复冻融，确保稳定性；
使用前于冰上解冻并轻柔混匀，瞬时离心后使用。
关键字： 马动脉炎病毒;PCR检测试剂盒;
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