NCI-H1975人肺腺癌细胞专用培养基 新品

产品介绍：

NCI-H1975细胞专用培养基由团队精心优化，经过长期测试，本产品可保持NCI-H1975细胞最佳的生长状态。

本产品中已包含NCI-H1975细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于NCI-H1975细胞的培养。

产品主要成分

RPMI-1640 基础培养基              445 ml

特级胎牛血清             50 mL

P/S青霉素-链霉素               5 mL

运输和保存

运输：放置于含有生物冰袋的保温箱中低温运输

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2个月；-20℃，避光，保存6个月。
质量控制

实验原理：

以RPMI-1640培养基为基础，添加10%优质胎牛血清和1%抗生素，模拟人肺腺癌细胞的生长环境，为NCI-H1975细胞提供充足的营养物质和能量，支持细胞的贴壁生长和增殖，同时该细胞株携带EGFR T790M突变，对吉非替尼耐药，可用于肺癌耐药机制的研究和抗耐药药物的筛选。

准备工作：

1. 试剂与材料

细胞专用培养基（包含基础培养基、生长添加剂、特级胎牛血清、双抗）

不含钙、镁离子的PBS缓冲液

0.25%Trypsin-0.02%EDTA消化液

无血清细胞冻存液

T25培养瓶、6cm培养皿、无菌离心管、移液枪及枪头等无菌耗材

2. 仪器设备

37℃、5%CO₂培养箱

低温离心机

-80℃超低温冰箱

液氮罐

倒置显微镜

超净工作台

培养基配制：

在超净工作台中，将500ml基础培养基倒入无菌容器中。

依次加入5ml上皮细胞生长添加剂、10ml特级胎牛血清和5ml双抗（青霉素/链霉素），轻轻摇晃容器使其充分混合均匀。

用0.22μm孔径的无菌滤膜对混合后的培养基进行过滤除菌，然后转移至无菌培养基瓶中备用。

公司正在出售的产品：

操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内完全解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。