基本信息
中文名称：DNase I
货号：P-PR1447
规格：1000U（1U/ul）
英文名称：Deoxyribonuclease I
作用机制：一种非特异性核酸内切酶，能高效消化单链或双链DNA，水解产物5'端为磷酸基团、3'端为羟基。其活性依赖钙离子，可被镁离子或二价锰离子激活：镁离子存在时随机剪切双链DNA任意位点；二价锰离子存在时在同一位点剪切DNA双链，形成平末端或1 - 2个核苷酸突出的粘末端。
适用样本：RNA样本（去除残留基因组DNA）、体外转录后RNA产物（去除残留DNA模板）、RNA建库测序前的总RNA（配合探针去除rRNA）、待标记的双链DNA（用于缺口平移法标记探针）等。
产品简介
DNase I即脱氧核糖核酸酶I，是一种非特异性的核酸内切酶，可随机水解单链或双链DNA的磷酸二酯键，生成带有5'-磷酸基团和3'-羟基末端的单核苷酸或寡核苷酸片段。
酶活特性
激活因子：活性依赖Ca²⁺，并需Mg²⁺或Mn²⁺激活
Mg²⁺存在时：随机切割双链DNA的单链，产生切口
Mn²⁺存在时：在双链DNA的同一位置切割两条链，产生平末端或1-2个核苷酸突出的粘末端
活性定义：37℃、10分钟内完全降解1μg pBR322质粒DNA所需的酶量为1个活性单位
检测条件：40mM Tris-HCl(pH8.0)、10mM MgSO₄、1mM CaCl₂、1μg pBR322 DNA
产品规格与组成
产品类型 组成成分 储存条件
纯酶制剂 5 U/μl DNase I、10×反应缓冲液 -20℃保存1年
试剂盒形式 DNase I、10×反应缓冲液、RNase-Free水 -20℃保存1年
高浓度溶液 10mg/mL DNase I溶液（1500-2500U） -20℃保存1年
主要用途
RNA样品制备：去除RNA中的基因组DNA污染，适用于RT-PCR等敏感实验
分子生物学研究：
DNase I足迹实验：研究DNA-蛋白质相互作用
缺口平移技术：制备标记的DNA探针
构建随机DNA片段文库
细胞生物学：TUNEL检测中作为阳性对照，剪切基因组DNA
操作方法
常规DNA消化反应体系（50μl）
成分 体积
10×DNase I Buffer 5μl
MgCl₂（25mM） 2μl
CaCl₂（10mM） 1μl
DNA样品 Xμl
DNase I（1U/μl） 1-5μl
RNase-Free水 补至50μl
反应条件：37℃孵育10-30分钟，根据DNA量调整时间
柱上消化法（RNA纯化试剂盒配套使用）
向吸附柱中加入80μl DNase I混合液（52μl水+8μl 10×Buffer+20μl酶）
20-30℃孵育15分钟
加入350μl洗涤缓冲液离心去除酶
失活与抑制方法
热失活：加入EDTA至终浓度2.5mM，65℃加热10分钟
化学失活：酚-氯仿抽提去除酶
抑制剂：
金属离子螯合剂（如EDTA）
锌离子（毫摩尔浓度）
0.1% SDS
高盐浓度（50-100mM以上）
还原剂（DTT、巯基乙醇）
注意事项
RNase-free版本可直接用于RNA处理，普通版本可能含RNase，需谨慎使用
避免反复冻融，建议分装保存
操作时使用无RNase的枪头和离心管，防止RNA降解
酶对剪切力敏感，混匀时避免剧烈涡旋，建议轻轻颠倒离心管
反应体系中Mg²⁺和Ca²⁺的浓度对酶活有显著影响，需严格按照缓冲液配方操作
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关键字： DNase I;Deoxyribonuclease I;
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