基本信息
产品名称 | Dnase I(Rnase free) | 货号 | P-PR1358 |
规格 | 1000U | 用途 | 仅供科研 |
英文名称：DNase I (RNase-free)
作用机制：一种无RNA酶污染的DNA酶I，可特异性降解DNA，对RNA无作用，能高效消化单链或双链DNA，产物为5'端带磷酸基团、3'端带羟基的核苷酸片段，活性依赖二价阳离子。
适用样本：RNA样本（去除残留基因组DNA）、体外转录后的RNA产物（去除残留DNA模板）、RNA建库测序前的总RNA等，用于去除样本中的DNA污染。
产品概述
这是一种无RNA酶污染的脱氧核糖核酸酶I，能特异地切割双链或单链DNA，产生带有5'-磷酸末端的寡核苷酸或单核苷酸。经过严格的质量控制，确保无RNA酶活性，避免对RNA相关实验造成干扰。广泛应用于RNA提取过程中去除DNA污染、体外转录前模板DNA的去除、染色质结构研究等实验，是分子生物学实验中去除DNA杂质的常用工具酶。
产品特点
无RNA酶污染：严格的生产工艺确保产品无RNase活性
双链特异性切割：优先切割双链DNA，对单链DNA亲和力较低
产物可控性：通过调节酶量和反应时间，可获得不同长度的DNA片段
宽反应条件：在pH5.0-9.0和25-50℃范围内均有活性
操作步骤
一、样本准备
取1-5mL漱口水样本转移至15mL离心管中，12000rpm离心10分钟，弃上清，收集细胞沉淀。
二、细胞裂解
向离心管中加入200~400μL细胞裂解液，再加入15~20μL蛋白酶K溶液
涡旋震荡10秒充分混匀，将离心管放入75℃恒温震荡器中，900rpm恒温震荡裂解45分钟
裂解完成后短暂离心，将上清液转移至新的离心管中
三、DNA吸附
向裂解上清中加入等体积的结合缓冲液，轻轻颠倒混匀
将混合液全部转移至一次性吸附柱中，12000rpm离心30秒，弃收集管中的废液
向吸附柱中加入500μL漂洗液，12000rpm离心30秒，弃废液；重复此漂洗步骤1次
四、DNA洗脱
将吸附柱放回收集管，12000rpm离心2分钟，彻底去除残留漂洗液
将吸附柱转移至新的1.5mL离心管中，向吸附柱中心加入50~100μL洗脱缓冲液（可预热至65℃提升洗脱效率）
室温静置2分钟，12000rpm离心1分钟，离心管中的液体即为提取完成的基因组DNA
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使用建议
溶解与保存：建议以液体形式保存于-20℃，避免反复冻融。
反应条件：常规反应温度为37℃，灭活需50℃处理5分钟。
推荐用量：根据实验体系优化，通常每50μL反应体系添加0.1-1U。
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