基本信息
中文名称：HS CUDG探针法荧光定量PCR试剂盒（防污染系统）
货号：P-PR1428
规格：100反应、200反应、500反应
英文名称：HS CUDG Probe-based Quantitative PCR Kit (Contamination Prevention System)
作用机制：利用探针法荧光定量PCR原理，特异性探针与目标DNA序列结合，在PCR扩增过程中，Taq酶的5' - 3'外切酶活性切割探针，释放荧光基团产生荧光信号，荧光强度与扩增的DNA量成正比。防污染系统可有效抑制扩增产物的交叉污染，保证检测准确性。
适用样本：基因组DNA、质粒DNA、PCR产物等纯化后的DNA样本。
产品概述
本试剂盒采用探针法荧光定量PCR技术，搭配dUTP/UDG防污染系统，可高效检测样本中的靶基因，适用于土壤、粪便、肿瘤、血液等复杂样本的科研检测。
产品特点
高特异性：使用化学修饰的超级热启动聚合酶，有效避免非特异扩增。
防污染设计：引入dUTP/UDG防污染系统，高效消除气溶胶对PCR检测的干扰。
强抗干扰能力：针对复杂样本优化反应体系，可稳定检测土壤、粪便等难度较高的样本。
稳定性优异：反应体系经充分验证，适合试剂盒开发及批量检测。
试剂盒组成
组件 规格 说明
2×HS CUDG Probe Mix 1ml/2ml 含热启动聚合酶、dNTP等
UDG酶（1U/μl） 20μl/50μl 防污染核心酶
探针混合液（10μM） 100μl 含特异性探针
引物混合液（10μM） 100μl 含上下游特异性引物
阳性对照 50μl 已知浓度的靶基因片段
无核酸酶水 1ml 用于体系配制及样本稀释
实验步骤
一、样本处理
采用常规核酸提取方法纯化样本DNA，推荐使用柱式提取试剂盒以保证纯度。
核酸浓度建议调整至10-100ng/μl，OD260/280比值应在1.8-2.0之间。
二、反应体系配制（20μl体系）
在冰浴中按以下顺序加入试剂：
试剂 体积 终浓度
2×HS CUDG Probe Mix 10μl 1×
UDG酶（1U/μl） 0.2μl 0.01U/μl
引物混合液（10μM） 0.4μl 0.2μM
探针混合液（10μM） 0.2μl 0.1μM
模板DNA 2μl 20-200ng
无核酸酶水 补至20μl -
三、PCR扩增程序
UDG预处理：50℃ 2分钟（降解残留的dU-DNA）
预变性：95℃ 3分钟（激活热启动聚合酶）
循环扩增（40个循环）：
95℃ 15秒（变性）
60℃ 30秒（退火+延伸，收集荧光信号）
四、结果分析
以阳性对照的浓度为横坐标，Ct值为纵坐标绘制标准曲线。
根据样本Ct值，通过标准曲线计算靶基因初始拷贝数。
Ct值＞38判定为阴性，需结合溶解曲线及重复实验确认结果。
注意事项
防污染操作：
实验需在独立的试剂配制区、样本处理区及扩增区进行，避免交叉污染。
所有移液器吸头使用带滤芯产品，操作过程中勤换手套。
试剂配制完成后，需在样本处理区加入模板DNA，严禁返回试剂区。
试剂保存：
2×HS CUDG Probe Mix、UDG酶需-20℃避光保存，避免反复冻融。
引物/探针混合液可-20℃长期保存，或4℃短期存放（1个月内）。
优化建议：
若出现非特异扩增，可适当提高退火温度（1-2℃）。
若Ct值偏高，可增加模板量至5μl，或优化样本提取方法以提高核酸纯度。
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