UDG多重探针法荧光定量PCR试剂盒（防污染系统）

基本信息‌

‌中文名称‌：UDG多重探针法荧光定量PCR试剂盒（防污染系统）

货号：P-PR1429

规格：100反应、200反应、500反应

‌英文名称‌：UDG Multiplex Probe-based Quantitative PCR Kit (Contamination Prevention System)
作用机制：在多重荧光定量PCR体系中引入尿嘧啶-DNA糖基化酶（UDG），可降解含有尿嘧啶的扩增产物（如之前实验残留的PCR产物），避免交叉污染；同时利用不同荧光标记的探针特异性识别不同靶基因，实现多重定量检测。 

适用样本：血液、体液、组织、拭子等提取的核酸样本，适用于病原体检测、基因表达分析等。
产品简介

本试剂盒专为核酸定量检测设计，采用多重TaqMan探针法，搭配UDG（尿嘧啶-DNA糖基化酶）防污染系统，解决PCR实验中气溶胶交叉污染导致假阳性的行业痛点。试剂盒组成完整，包含2×Multiplex Probe Master Mix、UDG酶、dUTP混合液、ROX参考染料等核心组分，可满足多次多重检测需求，无需额外搭配基础试剂。

核心优势

防污染能力强：UDG酶+dUTP底物双重防污染机制，反应前可特异性降解含尿嘧啶的残留PCR产物，彻底消除气溶胶污染干扰

多重检测效率高：优化的反应体系支持同时检测3-5个靶标基因，各通道荧光信号无交叉串扰，大幅提升检测通量

特异性与灵敏度兼顾：采用化学修饰的热启动Taq酶，结合TaqMan探针的序列特异性识别，有效避免非特异性扩增；最低检测限可达到5拷贝/反应，适合低丰度样本检测

兼容性广：适配主流荧光定量PCR仪器，无需调整ROX染料浓度，反应体系可兼容血清、血浆、组织匀浆等多种复杂样本

试剂盒组成（以100T规格为例）

组分 规格 保存条件

2×Multiplex Probe Master Mix 5mL -20℃避光保存

UDG酶（1U/μL） 100μL -20℃保存

dUTP混合液（10mM） 200μL -20℃保存

ROX参考染料（50×） 100μL 4℃避光保存

无核酸酶水 5mL -20℃保存

注：所有组分无核酸酶残留，仅用于科研；UDG酶避免反复冻融，建议分装为20μL/管保存

实验操作步骤

一、实验前准备

将试剂盒各组分置于冰上融化，充分混匀后短暂离心收集液体

准备无核酸酶的PCR反应管、枪头及离心管，实验全程在超净工作台中进行

根据待检测靶标数量，设计对应的TaqMan探针和引物序列（需提前验证特异性）

二、多重PCR反应体系配制（20μL体系）

试剂组分 体积（μL）

2×Multiplex Probe Master Mix 10

UDG酶（1U/μL） 0.2

dUTP混合液（10mM） 0.4

ROX参考染料（50×） 0.4

上游引物1（10μM） 0.4

下游引物1（10μM） 0.4

探针1（10μM） 0.2

*上游引物2（10μM） 0.4

*下游引物2（10μM） 0.4

*探针2（10μM） 0.2

模板DNA/RNA 2-5

无核酸酶水 补至20

注：带为可选组分，根据靶标数量添加，最多可同时添加5组引物探针

三、PCR反应程序设置

防污染预处理：50℃ 2分钟（UDG酶降解含尿嘧啶的污染产物）

预变性：95℃ 10分钟（激活热启动Taq酶）

循环扩增：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集荧光信号），40个循环

反应结束：4℃保温，可直接导出荧光数据进行分析

注意事项

防污染操作：实验分区进行（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免交叉污染；使用带滤芯的枪头，反应管盖紧后再转移至扩增区

模板质量控制：DNA模板需无RNA和蛋白污染，RNA模板需确保无基因组DNA残留，建议使用DNase I处理样本

探针引物设计：探针Tm值需高于引物Tm值5-10℃，不同靶标探针需标记不同荧光基团（如FAM、VIC、CY5等），避免光谱重叠

反应条件优化：复杂样本可将退火温度调整为58-62℃梯度优化，或适当调整引物探针浓度

试剂保存：UDG酶对温度敏感，避免室温放置超过30分钟；所有试剂需-20℃避光保存，建议小份分装使用

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