基本信息
中文名称：miRNA探针法荧光定量PCR试剂
货号：P-PR1433
规格：100反应、200反应、400反应
英文名称：miRNA Probe-based Quantitative PCR Reagent
作用机制：先将miRNA反转录为cDNA，然后使用针对目标miRNA cDNA的特异性探针和引物进行PCR扩增，探针与目标序列结合后，在PCR过程中被Taq酶切割释放荧光基团，荧光信号强度与miRNA的初始量正相关，从而实现定量检测。
适用样本：经过反转录得到的miRNA cDNA样本，其原始样本可为细胞、组织、体液等来源的总RNA。
产品概述
miRNA探针法荧光定量PCR试剂专门用于microRNA（miRNA）的定量检测，基于PolyA加尾反应与TaqMan探针技术，实现对miRNA的高特异性、高灵敏度扩增与检测，可精准完成绝对定量和相对定量分析，是miRNA功能研究、疾病标志物筛选等领域的理想工具。本试剂适用于细胞、组织、血清、血浆等多种样本来源的miRNA检测。
试剂盒组成（以100次20μL反应为例）
组分 规格
2×miRNA探针反应混合液 1.1mL
miRNA TaqMan探针混合液 110μL
50×ROX参考染料 40μL
无核酸酶水 1.1mL
产品特点
超高特异性：采用TaqMan探针与目标序列特异性结合，有效避免染料非特异性嵌入、引物错配导致的假阳性结果，可区分同源性极高的miRNA家族成员。
高灵敏度检测：配置高效热启动Taq酶，反应体系经充分优化，最低可检测到1pg血浆RNA中的目标miRNA分子。
准确定量能力：支持绝对定量（通过标准曲线计算拷贝数）和相对定量分析（比较样本间miRNA表达差异），检测结果客观可靠。
兼容性广泛：适配主流品牌荧光定量PCR仪，可根据仪器类型选择是否使用ROX参考染料进行信号校正。
使用方法
一、样本前处理
RNA提取：采用常规RNA提取试剂盒从样本中提取总RNA，确保RNA纯度（OD260/280在1.8-2.0之间）与完整性。
miRNA反转录：使用miRNA加尾法逆转录试剂盒将miRNA反转录为cDNA，具体操作参考对应试剂盒说明书。
二、PCR反应体系配制（冰浴操作）
在RNase-free离心管中依次加入以下组分：
成分 单孔用量
2×miRNA探针反应混合液 10μL
miRNA TaqMan探针混合液 1.0μL
cDNA模板 2-4μL
50×ROX参考染料 0.4μL（可选）
无核酸酶水 补至20μL
注：若PCR仪无孔间信号校正功能，可省略ROX参考染料。
三、PCR反应条件
预变性：95℃ 3-5分钟
循环扩增（40个循环）：
变性：95℃ 15秒
退火延伸：60℃ 60秒（采集荧光信号）
注：不同miRNA的最优退火温度可能略有差异，可根据预实验结果调整。
四、数据分析
绝对定量：将已知拷贝数的miRNA标准品进行梯度稀释，同步扩增后绘制标准曲线，根据样本Ct值计算目标miRNA的绝对拷贝数。
相对定量：以管家基因（如RPPH1、U6）为内参，采用2-ΔΔCt法计算样本间miRNA的相对表达量。
注意事项
本产品仅用于科研实验，禁止用于临床诊断或其他非科研用途。
操作全程需佩戴无粉手套、口罩，使用RNase-free耗材，避免RNA酶污染。
试剂使用前需在常温下充分融化混匀，瞬时离心后取用，避免产生气泡。
配制反应体系时应在冰浴中进行，避免试剂反复冻融，未用完试剂可分装后-20℃保存。
实验过程中需设置阴性对照（无模板对照）和阳性对照（已知阳性样本），以验证反应体系可靠性。
荧光探针对光敏感，试剂保存与操作过程中应避免强光照射。
不同批号试剂组分不可混用，试剂有效期为12个月，过期请勿使用。
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关键字： miRNA探针法荧光定量PCR试剂;miRNA Probe-based Qu;
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