荧光素酶探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 荧光素酶探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Luciferase Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4811 |
产品概述
本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术开发，专用于荧光素酶基因的快速、高灵敏检测。适用于科研领域的定性及定量分析，线性范围达5个数量级，可有效区分假阴性样本，避免非特异性交叉反应。
产品特点
高灵敏度与特异性：优化设计的引物和探针针对荧光素酶保守区域，避免与其他微生物DNA/RNA交叉反应。
即开即用：用户仅需提供模板DNA/RNA，试剂盒包含预混缓冲液、酶混合物及阳性对照。
双重检测模式：支持绝对定量（标准曲线法）和定性分析（Ct值判读）。
稳定可靠：50次20μL体系反应，批间差异小，重复性好。
包装规格
| 成分 | 规格 |
| 探针法qPCR缓冲液 | 500μL |
| 探针法qPCR酶混合液 | 50μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| PCR引物-探针干粉 | 50T |
| PCR阳性对照（10^7拷贝/μL）| 50μL |
操作流程
标准曲线制备（以10^1–10^6拷贝/μL为例）
稀释阳性对照：
标记6管（6–1号），每管加45μL稀释液。
6号管加入5μL阳性对照（10^7拷贝/μL），震荡混匀，得10^6拷贝/μL标准品，依次梯度稀释至10^1拷贝/μL。
注意：操作需在独立区域进行，避免污染。
样本DNA制备
推荐设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC）。PC为阳性对照1000倍稀释液。
兼容市售DNA提取试剂盒，需避免交叉污染。
qPCR反应体系（20μL）
定量分析：N+9个反应管（N样本 + 2对照 + 6标准曲线 + 1阴性对照）。
程序设置：
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 10 min |
| 预变性 | 95℃ | 10 min |
| 扩增（40循环）| 95℃ 15 sec → 60℃ 60 sec（采集FAM信号） |
数据分析
定量：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性：阴性对照Ct≥40；阳性对照Ct≤39且具典型扩增曲线。
保存与运输
短期：-20℃保存；长期：-70℃（≤6个月）。
运输需使用2–8℃冰袋，避免反复冻融。
注意事项
分区操作（样本处理、试剂配制、加样），使用一次性耗材。
反应液避光保存，避免气泡干扰。
实验后消毒台面（10%次氯酸或75%乙醇）。
仅限科研使用，不可用于临床诊断。
局限性
结果受样本质量、提取效率及运输条件影响。
基因突变可能导致假阴性；交叉污染易致假阳性。
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