基本信息
产品名称 | rNTP Mixture(25 mM each) | 货号 | P-PR1300 |
规格 | 0.5 ml | 用途 | 仅供科研 |
英文名称：rNTP Mixture (25 mM each)
作用机制：包含rATP、rUTP、rCTP、rGTP四种核糖核苷三磷酸，是RNA合成的基本原料，在RNA聚合酶的作用下，可连接到RNA链的3'末端，实现RNA链的延伸。
适用样本：体外转录反应、RNA标记、RNA测序建库、cDNA合成等所有需要RNA合成的实验体系。
产品概述
包含腺苷三磷酸（ATP）、鸟苷三磷酸（GTP）、胞苷三磷酸（CTP）和尿苷三磷酸（UTP）四种核糖核苷三磷酸的混合物，每种核糖核苷三磷酸的浓度均为25mM。作为RNA合成的核心原料，可广泛应用于体外转录、反转录反应、RNA标记、RNA测序文库构建等分子生物学实验，为RNA的合成与修饰提供充足的底物。
产品特点
高纯度原料：每种rNTP纯度均≥99%，无DNase和RNase污染
等摩尔浓度：ATP、GTP、CTP、UTP四种成分均为25mM
稳定性保障：经过特殊修饰处理，-20℃可稳定保存2年以上
通用兼容性：适用于所有体外转录、逆转录和RNA标记实验
操作步骤
一、试剂预处理
取出洗涤液Ⅰ和洗涤液Ⅱ浓缩液，按试剂瓶标注比例加入无水乙醇，充分混匀后备用
将洗脱液置于65℃水浴锅中预热
二、水样处理与核酸富集
取10mL预处理后的水样（杂质较多的水样需先经0.45μm滤膜过滤）加入50mL洁净烧杯
依次加入0.5mL核酸富集因子、5mL病毒裂解液及50μL消化液，充分搅拌混匀
将烧杯置于65℃水浴中孵育15分钟，期间每隔5分钟搅拌一次
三、核酸纯化与洗脱
向烧杯中加入15mL异丙醇，充分搅拌混匀后，将混合液转移至连接富集吸附柱的50mL注射器针筒内
静置2分钟后，开启真空抽滤装置，将液体缓慢抽滤至富集吸附柱内（注意不要抽干）
向针筒内加入5mL洗涤液Ⅰ，静置2分钟后抽滤；再加入5mL洗涤液Ⅱ，静置2分钟后抽滤，重复洗涤液Ⅱ步骤1次
取下富集吸附柱，放入收集管中，12000rpm常温离心3分钟，去除残留洗涤液
将吸附柱转移至新的收集管，加入50-100μL预热的洗脱液，静置2分钟后12000rpm离心2分钟
收集管中的液体即为纯化后的病毒核酸，可直接用于下游实验或-70℃保存
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注意事项
试剂保存：试剂盒应避光保存于2-8℃，有效期12个月；核酸富集因子避免反复冻融，使用后立即放回冰箱
水样预处理：高浊度或杂质过多的水样，需先经0.45μm滤膜过滤，避免堵塞吸附柱
操作规范：实验全程佩戴手套、口罩、护目镜等防护用品，避免直接接触水样与试剂；若不慎接触皮肤或眼睛，立即用大量清水冲洗
试剂配制：洗涤液需现用现配，按比例加入无水乙醇后充分混匀，未使用的稀释液可在2-8℃保存1个月
核酸保存：提取的核酸若长期保存，需置于-70℃环境，避免反复冻融；短期可在4℃保存24小时
器材要求：所有实验器材需为无RNA酶耗材，实验前可经180℃干烤6小时或用RNA酶清除剂处理
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