基本信息
产品名称 | Extreme Thermostable Rnase HII（极耐热Rnase HII） | 货号 | P-PR1372 |
规格 | 200U | 用途 | 仅供科研 |
英文名称：Extreme Thermostable RNase HII
作用机制：一种极耐热的核糖核酸酶HII，可特异性水解RNA-DNA杂合链中的RNA链，产生5'端带磷酸基团的核糖核苷酸和3'端带羟基的DNA链，在高温下仍能保持较高活性。
适用样本：RNA-DNA杂合链样本，适用于RT-PCR反应后去除RNA模板、核酸结构分析、基因编辑等实验，尤其适合在高温环境下进行的反应。
产品概述
这是一款具有极端耐热性的核糖核酸酶HII，能够特异性切割RNA-DNA杂合链中的RNA部分，产生带有3'-羟基和5'-磷酸末端的寡核苷酸片段。凭借出色的热稳定性，它可在高温条件下保持活性，适用于需要高温反应的实验体系，如PCR相关的RNA去除、cDNA合成后RNA模板的清除等，能有效提升实验的效率与特异性，尤其适合对温度要求较高的分子生物学实验。
产品特点
超高温耐受：最适反应温度65℃，95℃加热10分钟仍保持活性
RNA-DNA杂合链特异性：仅切割RNA-DNA杂交体中的RNA链
产物特征：产生带3'-羟基和5'-磷酸末端的寡核苷酸片段
扩增辅助功能：特别适合qPCR反应中去除残留RNA模板
操作步骤
一、实验前准备
向漂洗液1中加入60mL无水乙醇，向漂洗液2中加入45mL无水乙醇，充分混匀后标记
载体RNA溶液配制：向300μg载体RNA冻干粉中加入300μL无酶水，充分溶解后得到1μg/μL的工作液，分装后-20℃保存
将冷冻样本置于室温解冻，轻轻颠倒混匀后备用
二、手工提取流程
样本裂解：取200μL血液样本至1.5mL离心管中，加入20μL蛋白裂解酶、300μL裂解缓冲液，振荡混匀10秒，室温孵育10分钟（每3分钟颠倒混匀1次）
磁珠结合：加入15μL磁珠悬浮液（使用前充分振荡混匀），振荡混匀10秒，室温孵育10分钟（每3分钟颠倒混匀1次）
磁珠分离：将离心管置于磁力架上，静置1-2分钟至磁珠完全吸附，小心吸弃上清液（避免触碰磁珠）
洗涤纯化：
取下离心管，加入500μL漂洗液1，振荡混匀1分钟，再次置于磁力架上分离磁珠，吸弃上清
重复上述操作1次
加入500μL漂洗液2，振荡混匀1分钟，置于磁力架上分离磁珠，吸弃上清
重复上述操作1次
干燥磁珠：保持离心管在磁力架上，室温晾干5-10分钟（确保乙醇完全挥发，避免过度干燥）
核酸洗脱：加入100-200μL洗脱缓冲液，振荡混匀后56℃孵育5分钟，置于磁力架上分离磁珠，上清液即为提取的核酸
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注意事项
实验操作需在洁净环境中进行，佩戴手套、口罩，避免样本交叉污染
蛋白酶K需-20℃保存，使用时避免反复冻融，可分装后使用
还原剂需现用现加，避免长时间暴露于空气中失效
若毛囊样本角质化严重，可适当延长孵育时间或增加还原剂用量
提取的DNA可置于-20℃长期保存，短期可在4℃储存
若需提高DNA产量，可将洗脱液重复洗脱一次吸附柱
关键字： Extreme Thermostable;
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