基本信息
产品名称 | RnaseH | 货号 | P-PR1349 |
规格 | 250U、2500U | 用途 | 仅供科研 |
英文名称：RNaseH
作用机制：一种核糖核酸酶H，可特异性水解RNA-DNA杂合链中的RNA链，产生5'端带磷酸基团的核糖核苷酸和3'端带羟基的DNA链，无法降解单链RNA或双链DNA。
适用样本：RNA-DNA杂合链样本，适用于RT-PCR反应后去除RNA模板、cDNA合成、核酸结构分析等实验。
产品概述
这是一种核糖核酸酶H，能够特异性切割RNA-DNA杂合双链中的RNA部分，产生带有3'-羟基和5'-磷酸末端的产物。它不降解单链或双链DNA以及单链RNA，主要用于体外转录后去除DNA模板、cDNA合成后降解RNA引物、PCR反应中去除RNA杂质等实验，在分子克隆、基因表达分析等领域发挥着重要作用，确保实验体系中RNA-DNA杂合链的有效清除。
产品特点
特异性切割：仅降解RNA-DNA杂合链中的RNA部分，对单链/双链DNA无活性
产物特征：生成带3'-羟基和5'-磷酸末端的寡核苷酸片段
温度特性：最适反应温度37℃，65℃处理20分钟可完全失活
功能应用：去除cDNA合成中的RNA模板、清除poly(A)尾巴干扰
操作步骤
一、样本准备
取1-5mL漱口水样本转移至15mL离心管中，12000rpm离心10分钟，弃上清，收集细胞沉淀。
二、细胞裂解
向离心管中加入200~400μL细胞裂解液，再加入15~20μL蛋白酶K溶液
涡旋震荡10秒充分混匀，将离心管放入75℃恒温震荡器中，900rpm恒温震荡裂解45分钟
裂解完成后短暂离心，将上清液转移至新的离心管中
三、DNA吸附
向裂解上清中加入等体积的结合缓冲液，轻轻颠倒混匀
将混合液全部转移至一次性吸附柱中，12000rpm离心30秒，弃收集管中的废液
向吸附柱中加入500μL漂洗液，12000rpm离心30秒，弃废液；重复此漂洗步骤1次
四、DNA洗脱
将吸附柱放回收集管，12000rpm离心2分钟，彻底去除残留漂洗液
将吸附柱转移至新的1.5mL离心管中，向吸附柱中心加入50~100μL洗脱缓冲液（可预热至65℃提升洗脱效率）
室温静置2分钟，12000rpm离心1分钟，离心管中的液体即为提取完成的基因组DNA
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使用建议
溶解与保存：建议以液体形式保存于-20℃，避免反复冻融。
反应条件：常规反应温度为37℃，灭活需50℃处理5分钟。
推荐用量：根据实验体系优化，通常每50μL反应体系添加0.1-1U。
关键字： RnaseH;
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