基本信息
中文名称:超级多重荧光定量PCR试剂盒(探针)
货号:P-PR1426
规格:100反应、200反应、500反应
英文名称:Super Multiplex Quantitative PCR Kit (Probe-based)
作用机制:优化的PCR反应体系搭配多种荧光标记的探针,可在同一反应管中同时对多个靶基因进行扩增和荧光检测,提高检测通量;特殊的热启动聚合酶增强了反应的特异性和灵敏度。
适用样本:核酸提取物,可用于病原体高通量检测、基因表达谱分析等。
产品简介
本试剂盒专为多重荧光定量PCR检测设计,采用探针法(兼容TaqMan®、Scorpions®等探针类型),可同时对多个靶标基因进行精准定量检测。试剂盒以预混液形式提供,搭配优化的超级热启动聚合酶与反应缓冲液,能在复杂样本中实现高特异性、高灵敏度的基因扩增,40个循环仅需20多分钟即可完成,适用于基因表达分析、病原体检测、SNP分型等多种分子生物学实验。
产品特点
多重检测能力:可同时检测2-10个靶标基因,大幅提升实验效率
超高特异性:超级热启动酶结合探针杂交技术,有效降低非特异性扩增
快速高效:优化的反应体系使40个循环扩增仅需20-25分钟
高灵敏度:最低可检测1pg总RNA或10拷贝的靶基因
抗干扰性强:适配土壤、粪便、血液等复杂样本,重复性好
操作便捷:预混液形式包装,无需复杂试剂配制
试剂盒组成
组分名称 规格(以100次反应装为例)
2×超级多重PCR预混液 1.25ml × 8
ROX校正染料(50×) 50μL
无核酸酶水 10ml
阳性对照(可选) 100μL
阴性对照(可选) 100μL
实验操作步骤
样本准备
核酸提取:采用合适方法提取样本中的DNA或RNA,确保核酸无降解、无抑制剂污染
RNA样本处理:若样本为RNA,需先反转录为cDNA(推荐使用本品牌逆转录试剂盒)
样本定量:用分光光度计或Qubit测定核酸浓度,将所有样本统一稀释至10-100ng/μL
反应体系配制
在冰上配制PCR反应体系,每个反应体系体积推荐为20μL:
试剂组分 体积(20μL体系)
2×超级多重PCR预混液 10μL
ROX校正染料(50×) 0.4μL
上游引物混合物(10μM) 0.8μL
下游引物混合物(10μM) 0.8μL
探针混合物(10μM) 0.4-0.8μL
模板DNA/cDNA 2μL
无核酸酶水 补足至20μL
注:引物和探针的终浓度需根据靶标基因数量和特异性进行优化,推荐终浓度为0.2-0.4μM
上机扩增
将配制好的反应管放入荧光定量PCR仪,设置如下扩增程序:
预变性与酶激活:95℃ 10分钟(激活热启动酶)
PCR循环(40个循环):
变性:95℃ 15秒
退火延伸:60℃ 1分钟(采集荧光信号)
注:若靶标基因Tm值差异较大,可采用 touchdown PCR 程序或分两步进行退火延伸
结果分析
基线设置:将基线设置在3-15个循环的荧光信号范围内
阈值设置:将阈值线设置在扩增曲线的指数增长期
数据分析:
绝对定量:通过标准曲线计算样本中靶基因的初始拷贝数
相对定量:采用ΔΔCt法计算不同样本间基因表达量的差异
多重检测:需确保各探针的荧光通道无交叉干扰
注意事项
试剂盒所有组分需在-20℃避光保存,避免反复冻融;ROX校正染料可在2-8℃短期保存
实验操作需在无核酸酶环境中进行,使用无菌无酶的吸头和离心管
引物和探针需经PAGE或HPLC纯化,稀释后在-20℃分装保存
若样本中含有PCR抑制剂(如血红素、腐殖酸等),需对样本进行纯化或适当稀释
多重检测时需优化引物和探针浓度,避免引物二聚体和通道间干扰
每次实验需设置阴性对照(无模板)和阳性对照(已知浓度的靶基因)
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