超级热启动DNA聚合酶

基本信息‌

‌中文名称‌：超级热启动DNA聚合酶

货号：P-PR1445

规格：250U 5u/ul、500U 5u/ul、1000U 5u/ul

‌英文名称‌：Super Hot Start DNA Polymerase
作用机制：通过化学修饰或抗体结合，使聚合酶在低温下处于无活性状态，升温至PCR变性温度时才恢复活性，有效减少非特异性扩增；同时具备高效的DNA扩增能力和热稳定性，可用于长片段或高难度模板的扩增。 

适用样本：各种来源的DNA模板，包括基因组DNA、cDNA、质粒DNA等。
产品简介

超级热启动DNA聚合酶是经化学修饰的热稳定重组型Taq DNA聚合酶，室温下酶活性被完全封闭，仅在95℃加热后活性才会释放，能有效避免样品准备及反应升温阶段的非特异扩增和引物二聚体形成，特别适合从复杂模板（基因组、cDNA）中扩增低拷贝基因。

产品特点

高严谨性：化学修饰的活性封闭更彻底，相比抗体型热启动酶，能最大程度减少非特异扩增

快速激活：仅需5分钟95℃加热即可完全激活，兼容现有常规PCR程序

复杂样本兼容：优化的反应缓冲液可有效抵御土壤、粪便、肿瘤组织等复杂样本中的杂质干扰

高灵敏度：可检测低至1.6pg的人基因组DNA模板，Ct值比同类产品早1-2个循环

多重PCR适配：酶动力强劲，指数扩增期长，适合多靶点同时扩增检测

产物直接克隆：PCR产物3'端带A碱基，可直接连接T载体进行克隆

产品组分（500U规格）

组分 规格

10×HS PCR Buffer（含20mM MgCl₂） 1.25ml

25mM MgCl₂ 1ml

dNTP Mix（各10mM） 200μl

超级热启动DNA聚合酶（5U/μl） 50μl

5×PCR Enhancer（高GC片段扩增用） 500μl

10×Loading Buffer 1ml

活性定义

以活化的大马哈鱼精子DNA为模板/引物，在74℃条件下30分钟内，催化10nmol dNTP掺入成为酸性不溶物所需的酶量为1个活性单位（U）。

使用方法

1. 标准PCR反应体系（50μl）

组分 体积 终浓度

ddH₂O 33.25μl -

10×HS PCR Buffer 5μl 1×

上游引物（10μM） 2.5μl 0.5μM

下游引物（10μM） 2.5μl 0.5μM

dNTP Mix（10mM） 1μl 0.2mM

模板DNA 5μl 1ng-1μg

超级热启动DNA聚合酶（5U/μl） 0.75μl 3.75U

2. 推荐PCR程序

步骤 温度 时间 循环数

预变性/酶激活 95℃ 5分钟 1循环

变性 95℃ 30秒 35循环

退火 55-65℃ 30秒

延伸 72℃ 30秒/kb

最终延伸 72℃ 5分钟 1循环

保温 4℃ 保存 -

3. 注意要点

对于大多数PCR反应，Mg²⁺最佳终浓度为1.5-2mM，可根据需要用25mM MgCl₂进行梯度优化

高GC含量片段扩增时，可加入10μl 5×PCR Enhancer（终浓度1×）

引物设计建议：Tm值55-65℃，GC含量40%-60%，3'端最后一个碱基为G/C

运输与保存

运输条件：冰袋（wet ice）低温运输

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融

稳定性：-20℃保存12个月活性保持90%以上

质量检测标准

核酸外切酶残留：10U酶与0.6μg λ-HindⅢ在74℃孵育1小时，DNA电泳条带无变化

核酸内切酶残留：10U酶与0.6μg超螺旋pBR322 DNA在74℃孵育1小时，DNA电泳条带无变化

大肠杆菌DNA残留：以ddH₂O为模板扩增大肠杆菌16S rDNA，35循环后无扩增条带

功能验证：以100ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因，可得到单一360bp条带

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