基本信息
中文名称:尿液DNA提取试剂盒
货号:P-PR1485
规格:50T、100T
英文名称:Urine DNA Extraction Kit
作用机制:利用离心或过滤方法富集尿液中的细胞,裂解细胞释放DNA,去除尿液中的尿素、盐类等抑制物,纯化得到可用于后续实验的DNA。
适用样本:人类或动物尿液样本。
产品概述
本试剂盒专为从尿液中提取基因组DNA设计,提取的DNA可直接用于PCR反应、DNA甲基化鉴定、癌症检测等分子生物学实验。尿液中DNA来源于尿道脱落细胞,用尿液进行分子生物学研究和临床诊断具有两大显著优势:一是尿液收集为非介入、无创伤性操作;二是从尿液中提取DNA比从血液中提取更简便。
试剂盒组成(以50次样本为例)
组分 规格
缓冲液UB 10ml
结合液CB 15ml
抑制物去除液IR 25ml
漂洗液WB 13ml
洗脱缓冲液EB 15ml
蛋白酶K溶液(20mg/mL) 1mL
吸附柱AC及收集管 50套
产品特点
操作简便:整个流程可在室温下约20分钟内完成,适合大规模样品处理。
DNA产率稳定:女性尿液DNA产率一般为50 - 200ng/mL,男性一般为3 - 50ng/mL。
DNA纯度高:提取的DNA纯净,无抑制剂,A260/A280值为1.7 - 1.9,可直接用于下游实验。
安全无毒:不含苯酚和氯仿等有毒溶剂,对人体无毒性、腐蚀性和刺激性气味。
性价比高:质量与国外同类产品相当,但价格更实惠。
操作步骤
样本前处理:取5mL尿液置于离心管中,5000rpm离心5分钟,小心弃去上清。加入1mL生理盐水,轻轻振荡混匀,将悬液转移至1.5mL离心管中,5000rpm离心5分钟,弃去900μL上清,剩余100μL上清振荡混匀。
裂解与消化:向样本中加入200μL裂解液、3μL DNA浓缩液和20μL消化液,振荡混匀后,56℃水浴10分钟。
DNA结合:加入500μL析出液,轻轻颠倒混匀(如有半透明悬浮物不影响提取效果)。将上述溶液转入吸附柱内,静置2分钟,12000rpm室温离心1分钟,弃去收集管内废液。
杂质洗涤:向吸附柱内加入500μL洗涤液,12000rpm室温离心1分钟,弃去废液;重复此步骤1次。
干燥吸附柱:将吸附柱放回收集管,12000rpm室温离心2分钟,彻底去除残留洗涤液。
DNA洗脱:将吸附柱放入新的1.5mL离心管内,加入30 - 60μL预热至56℃的洗脱液,静置2分钟,12000rpm室温离心2分钟,收集洗脱液即为纯化的DNA。
注意事项
所有离心步骤均需在室温下完成,需使用转速可达13000rpm的传统台式离心机。
结合液CB或抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀,可在37℃水浴几分钟助其重新溶解,恢复澄清透明后冷却至室温即可使用。
蛋白酶K保存在即用型甘油缓冲液中,常温运输;收到后,不超过25℃室温至少可保存6个月,4℃可保存12个月,-20℃可保存2年。
第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇,充分混匀,并及时标记已加入乙醇,避免重复添加。
加入蛋白酶K和结合液后需立刻涡旋振荡充分混匀,若样品粘稠不易混匀可涡旋振荡15秒,混匀不充分会严重降低DNA产量。
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