HotStart Bst 4.2 Basic Bead(基础冻干球)

基本信息‌

‌英文名称‌：HotStart Bst 4.2 Basic Bead (Basic Lyophilized Bead)
作用机制：将热启动型Bst 4.2 DNA聚合酶及相关反应成分制成冻干微球。热启动聚合酶在低温下无活性，只有在高温激活后才发挥聚合酶活性，有效降低非特异性扩增，同时冻干形式便于保存和使用。

适用样本：适用于对特异性要求较高的等温扩增实验，如病原体检测、基因分型等，样本包括临床样本、动植物组织、微生物样本等。
产品概述
以热启动型Bst 4.2 DNA聚合酶为核心的冻干球试剂，采用冻干技术封装，便于储存和运输。热启动设计使酶在低温下无活性，只有在升温至特定温度后才会激活，有效抑制非特异性扩增，保证反应的高特异性。产品保留了Bst 4.2聚合酶的强链置换活性和高热稳定性，使用时只需加入样本和引物即可进行等温扩增，适用于病原体检测、基因分型等需要高特异性的等温扩增实验。
产品特点
热启动特性：低温下酶活性被抑制，升温至65℃激活，非特异性扩增低

冻干球剂型：便于储存和运输，直接加入样本即可反应

强链置换活性：Bst 4.2酶具有超强链置换活性，等温扩增效率高

高稳定性：冻干状态下酶活性长期保持，重复性好
实验前准备

试剂与耗材检查：确认PCR预混液、上下游引物、模板DNA、无酶水等试剂在有效期内，外观无浑浊、沉淀；PCR管、枪头需为无酶无菌规格。

仪器预热：提前10-15分钟启动PCR仪，设置好反应程序，确保仪器达到预设温度。

环境准备：在超净工作台内操作，佩戴无粉手套，避免交叉污染；操作前用75%酒精擦拭台面和移液器。

反应体系配制

冰上操作：将所有试剂放置于冰盒内，避免酶失活。

体系配比（以25μL体系为例）：

PCR预混液（含Taq酶、dNTP、Buffer）：12.5μL

上游引物（10μM）：1μL

下游引物（10μM）：1μL

模板DNA：1-5μL（根据模板浓度调整）

无酶水：补足至25μL

轻柔混匀：用移液器轻轻吹吸混合液3-5次，避免产生气泡；若有气泡可短暂离心去除。

分装体系：将配制好的反应液分装至PCR管中，每管25μL，盖紧管盖。

PCR仪上机反应

程序设置：根据引物Tm值和实验需求设置三步法或两步法程序：

预变性：95℃，3-5分钟

循环阶段：95℃变性30秒，55-65℃退火30秒，72℃延伸（根据片段长度调整，1kb约1分钟），循环25-35次

终延伸：72℃，5-10分钟

保温：4℃。

上机运行：将PCR管放入PCR仪样品槽，确保管盖紧密贴合；启动程序，等待反应完成。

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注意事项

无菌操作：所有试剂和耗材需高压灭菌或无菌处理，避免外源DNA污染

温度控制：酶、dNTP等试剂需-20℃储存，避免反复冻融

体系优化：根据引物Tm值、模板类型调整Mg²+浓度和退火温度

对照设置：每次实验需设置阴性对照（无模板）和阳性对照（已知阳性模板）