Bst 4.0 Basic Bead

基本信息‌

‌英文名称‌：Bst 4.0 Basic Bead
作用机制：将Bst 4.0 DNA聚合酶及相关反应成分包埋在冻干微球中，使用时加入样本和缓冲液即可溶解启动反应。Bst 4.0聚合酶具有更强的链置换活性和热稳定性，在恒温条件下高效催化DNA合成，适用于等温扩增。

适用样本：适用于各类等温扩增实验，如LAMP、RCA（滚环扩增）等，可用于病原体检测、基因分型、食品安全检测等领域，样本包括临床样本、食品样本、环境样本等。
产品概述
以Bst 4.0 DNA聚合酶为核心的冻干球型试剂，采用冻干技术将酶及反应缓冲液等组分封装成球状，便于储存和使用。该产品保留了Bst 4.0聚合酶的强链置换活性和高热稳定性，可直接加入样本和引物进行等温扩增反应，无需复杂的试剂配制步骤，适用于现场快速检测、高通量样本筛查等场景，具有操作便捷、稳定性好的特点。
产品特点
冻干球剂型：将酶和缓冲液等组分冻干成球状，便于储存和运输

稳定性提升：冻干技术有效保护酶活性，-20℃可长期保存

操作便捷：直接加入样本和引物即可进行等温扩增，无需试剂配制

现场检测适配：适用于现场快速检测、高通量样本筛查等场景
核心PCR试剂及使用方法

1. Taq DNA聚合酶

作用：催化DNA链的延伸，是PCR反应的核心酶

使用方法：

通常按0.5-2U/25μL体系添加，具体用量参照试剂说明书

酶对温度敏感，需在冰上操作，避免反复冻融

最后加入酶液，防止提前激活导致非特异性扩增

2. dNTP混合液

作用：提供DNA合成的原料（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）

使用方法：

终浓度一般为200μmol/L每种dNTP，总浓度800μmol/L

避免反复冻融，可分装成小体积储存

注意pH值，过酸或过碱会抑制聚合酶活性

3. PCR缓冲液

作用：提供酶促反应的适宜环境（pH、离子浓度）

使用方法：

通常为10×浓度，使用时稀释至1×终浓度

含Mg²+的缓冲液需注意Mg²+浓度，一般1.5-2.5mmol/L为最优范围

部分缓冲液含KCl、Tris-HCl等成分，无需额外添加

4. 引物（上游/下游）

作用：定位扩增区域，引导DNA合成起始

使用方法：

终浓度一般为0.1-1μmol/L，根据引物Tm值调整

引物需用TE缓冲液或无菌水溶解，浓度计算准确

避免引物降解，-20℃分装储存，避免反复冻融

5. 模板DNA

作用：提供扩增的原始DNA模板

使用方法：

模板浓度一般为1ng-1μg/25μL体系，根据模板类型调整

基因组DNA需充分纯化，避免蛋白、RNA等杂质污染

质粒DNA可适当减少用量，一般10-100ng即可

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实验流程

反应体系配制：按1×工作浓度混合预混液、模板（10-100 ng）、引物（0.2-0.5 μM）及无核酸酶水。

PCR程序：

预变性：95℃ 30 sec

扩增循环（40×）：95℃ 5 sec → 60℃ 30 sec（荧光采集）

熔解曲线分析：60-95℃梯度升温。

注意事项

避免反复冻融，推荐分装保存。

熔解曲线需呈现单一峰以确保扩增特异性。

若需绝对定量，建议配套标准品使用。