Benzonase 核酸酶

基本信息‌

‌英文名称‌：Benzonase Nuclease
作用机制：一种非特异性核酸酶，可高效降解双链DNA、单链DNA、RNA以及DNA-RNA杂交体，将核酸降解为寡核苷酸和单核苷酸，广泛用于蛋白质纯化过程中去除核酸污染，提高蛋白质的纯度和质量。

适用样本：适用于蛋白质纯化实验，可处理细胞裂解液、组织匀浆、重组蛋白表达产物等样本，去除其中的核酸杂质。
产品概述
一种广谱核酸酶，可在广泛的条件下降解各种形式的核酸（双链DNA、单链DNA、RNA），将其水解为寡核苷酸和单核苷酸。该酶无特异性序列要求，能彻底降解核酸，常用于去除蛋白质样品中的核酸污染、细胞裂解液的核酸清除、疫苗生产中的核酸残留去除等场景，保证蛋白质样品的纯度，避免核酸对后续实验的干扰。
产品特点
全能核酸降解：可高效降解所有形式的DNA和RNA，产物为2-5碱基的寡核苷酸

降低样品粘度：快速降低蛋白样品粘度，提高蛋白产量和纯化效率

无蛋白酶活性：不降解蛋白质，不影响目标蛋白的结构和功能

广泛应用：适用于蛋白纯化、细胞裂解液处理、疫苗制备等多种场景
实验前准备

试剂与耗材检查：确认PCR预混液、上下游引物、模板DNA、无酶水等试剂在有效期内，外观无浑浊、沉淀；PCR管、枪头需为无酶无菌规格。

仪器预热：提前10-15分钟启动PCR仪，设置好反应程序，确保仪器达到预设温度。

环境准备：在超净工作台内操作，佩戴无粉手套，避免交叉污染；操作前用75%酒精擦拭台面和移液器。

反应体系配制

冰上操作：将所有试剂放置于冰盒内，避免酶失活。

体系配比（以25μL体系为例）：

PCR预混液（含Taq酶、dNTP、Buffer）：12.5μL

上游引物（10μM）：1μL

下游引物（10μM）：1μL

模板DNA：1-5μL（根据模板浓度调整）

无酶水：补足至25μL

轻柔混匀：用移液器轻轻吹吸混合液3-5次，避免产生气泡；若有气泡可短暂离心去除。

分装体系：将配制好的反应液分装至PCR管中，每管25μL，盖紧管盖。

PCR仪上机反应

程序设置：根据引物Tm值和实验需求设置三步法或两步法程序：

预变性：95℃，3-5分钟

循环阶段：95℃变性30秒，55-65℃退火30秒，72℃延伸（根据片段长度调整，1kb约1分钟），循环25-35次

终延伸：72℃，5-10分钟

保温：4℃。

上机运行：将PCR管放入PCR仪样品槽，确保管盖紧密贴合；启动程序，等待反应完成。

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注意事项

无菌操作：所有试剂和耗材需高压灭菌或无菌处理，避免外源DNA污染

温度控制：酶、dNTP等试剂需-20℃储存，避免反复冻融

体系优化：根据引物Tm值、模板类型调整Mg²+浓度和退火温度

对照设置：每次实验需设置阴性对照（无模板）和阳性对照（已知阳性模板）