Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer

基本信息‌

‌英文名称‌：Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer
作用机制：含有去污剂（如NP-40、Triton X-100）、盐类、蛋白酶抑制剂等成分。去污剂可破坏细胞膜和核膜，释放细胞内的蛋白质；盐类可调节溶液的离子强度，促进蛋白质的溶解；蛋白酶抑制剂可防止蛋白质被降解，用于免疫共沉淀（Co-IP）和免疫沉淀（IP）实验中裂解细胞，提取和保持蛋白质的天然构象及相互作用。

适用样本：适用于哺乳动物细胞、组织等样本，用于研究蛋白质之间的相互作用、蛋白质的翻译后修饰等实验。
产品概述
专为免疫共沉淀（Co-IP）和免疫沉淀（IP）实验设计的RIPA裂解缓冲液，包含多种去污剂、蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂等组分。该缓冲液能有效裂解细胞，释放细胞内的蛋白质，同时保持蛋白质的天然构象和相互作用，防止蛋白质的降解和去磷酸化。适用于从细胞或组织样本中提取可用于免疫沉淀实验的蛋白质，研究蛋白质之间的相互作用或蛋白质的修饰状态。
产品特点
细胞裂解高效：能有效裂解细胞，释放细胞内的蛋白质

保持蛋白相互作用：优化的缓冲液配方，保持蛋白质的天然构象和相互作用

抑制酶解：添加蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，防止蛋白质降解和去磷酸化

实验适配：专为免疫共沉淀（Co-IP）和免疫沉淀（IP）实验设计
核心PCR试剂及使用方法

1. Taq DNA聚合酶

作用：催化DNA链的延伸，是PCR反应的核心酶

使用方法：

通常按0.5-2U/25μL体系添加，具体用量参照试剂说明书

酶对温度敏感，需在冰上操作，避免反复冻融

最后加入酶液，防止提前激活导致非特异性扩增

2. dNTP混合液

作用：提供DNA合成的原料（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）

使用方法：

终浓度一般为200μmol/L每种dNTP，总浓度800μmol/L

避免反复冻融，可分装成小体积储存

注意pH值，过酸或过碱会抑制聚合酶活性

3. PCR缓冲液

作用：提供酶促反应的适宜环境（pH、离子浓度）

使用方法：

通常为10×浓度，使用时稀释至1×终浓度

含Mg²+的缓冲液需注意Mg²+浓度，一般1.5-2.5mmol/L为最优范围

部分缓冲液含KCl、Tris-HCl等成分，无需额外添加

4. 引物（上游/下游）

作用：定位扩增区域，引导DNA合成起始

使用方法：

终浓度一般为0.1-1μmol/L，根据引物Tm值调整

引物需用TE缓冲液或无菌水溶解，浓度计算准确

避免引物降解，-20℃分装储存，避免反复冻融

5. 模板DNA

作用：提供扩增的原始DNA模板

使用方法：

模板浓度一般为1ng-1μg/25μL体系，根据模板类型调整

基因组DNA需充分纯化，避免蛋白、RNA等杂质污染

质粒DNA可适当减少用量，一般10-100ng即可

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实验流程

反应体系配制：按1×工作浓度混合预混液、模板（10-100 ng）、引物（0.2-0.5 μM）及无核酸酶水。

PCR程序：

预变性：95℃ 30 sec

扩增循环（40×）：95℃ 5 sec → 60℃ 30 sec（荧光采集）

熔解曲线分析：60-95℃梯度升温。

注意事项

避免反复冻融，推荐分装保存。

熔解曲线需呈现单一峰以确保扩增特异性。

若需绝对定量，建议配套标准品使用。