WB Super RIPA Lysis Buffer

基本信息‌

‌英文名称‌：WB Super RIPA Lysis Buffer
作用机制：含有高浓度的去污剂、盐类和蛋白酶抑制剂，可高效裂解细胞，释放细胞内的蛋白质，同时保持蛋白质的抗原性，适用于Western blotting实验中蛋白质的提取。

适用样本：适用于哺乳动物细胞、组织等样本的蛋白质提取，用于Western blotting检测、蛋白质组学分析等实验。
产品概述
WB Super RIPA Lysis Buffer即WB专用强裂细胞裂解液，是用于从细胞或组织中提取总蛋白的高效裂解试剂，专为Western Blot实验优化设计。它包含多种去污剂（如SDS、Triton X-100等）、蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂等组分，能快速破坏细胞膜结构，充分释放细胞内蛋白，同时有效抑制蛋白降解与去磷酸化，最大程度保持蛋白的天然状态与修饰水平。该裂解液裂解效率高，可适用于多种细胞系与组织样本，裂解后的蛋白样品经简单处理即可直接用于Western Blot、蛋白定量等实验，为后续蛋白检测分析提供高质量的蛋白样品。
产品特点
高效裂解能力：混合多种去污剂（SDS、Triton X-100等），快速裂解细胞与组织，充分释放胞内蛋白。

蛋白保护体系：内置蛋白酶与磷酸酶抑制剂，有效防止蛋白降解与去磷酸化，保持蛋白天然修饰状态。

适配WB实验：裂解液成分优化，不影响后续蛋白电泳与免疫印迹反应，无需额外处理。

通用性强：适用于动物细胞、组织、细菌、酵母等多种样本，满足不同实验需求。
核心PCR试剂及使用方法

1. Taq DNA聚合酶

作用：催化DNA链的延伸，是PCR反应的核心酶

使用方法：

通常按0.5-2U/25μL体系添加，具体用量参照试剂说明书

酶对温度敏感，需在冰上操作，避免反复冻融

最后加入酶液，防止提前激活导致非特异性扩增

2. dNTP混合液

作用：提供DNA合成的原料（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）

使用方法：

终浓度一般为200μmol/L每种dNTP，总浓度800μmol/L

避免反复冻融，可分装成小体积储存

注意pH值，过酸或过碱会抑制聚合酶活性

3. PCR缓冲液

作用：提供酶促反应的适宜环境（pH、离子浓度）

使用方法：

通常为10×浓度，使用时稀释至1×终浓度

含Mg²+的缓冲液需注意Mg²+浓度，一般1.5-2.5mmol/L为最优范围

部分缓冲液含KCl、Tris-HCl等成分，无需额外添加

4. 引物（上游/下游）

作用：定位扩增区域，引导DNA合成起始

使用方法：

终浓度一般为0.1-1μmol/L，根据引物Tm值调整

引物需用TE缓冲液或无菌水溶解，浓度计算准确

避免引物降解，-20℃分装储存，避免反复冻融

5. 模板DNA

作用：提供扩增的原始DNA模板

使用方法：

模板浓度一般为1ng-1μg/25μL体系，根据模板类型调整

基因组DNA需充分纯化，避免蛋白、RNA等杂质污染

质粒DNA可适当减少用量，一般10-100ng即可

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实验流程

反应体系配制：按1×工作浓度混合预混液、模板（10-100 ng）、引物（0.2-0.5 μM）及无核酸酶水。

PCR程序：

预变性：95℃ 30 sec

扩增循环（40×）：95℃ 5 sec → 60℃ 30 sec（荧光采集）

熔解曲线分析：60-95℃梯度升温。

注意事项

避免反复冻融，推荐分装保存。

熔解曲线需呈现单一峰以确保扩增特异性。

若需绝对定量，建议配套标准品使用。